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Teneur en flavonoïdes, en tanins et en polyphénols de l’huile de Nigella sativa
Dosage des flavonoïdes totaux Principe Le dosage des flavonoïdes totaux est effectué selon la méthode décrite par Zhishen et al., (1999). Elle est basée sur un test colorimétrique utilisant le trichlorure d’aluminium AlCl3. Ce dernier forme des complexes acides stables soit avec le carbonyle (C=O en position C-4) soit avec le groupe hydroxyle (en C-3 ou C-5) des flavones et des flavonols, mais également avec les groupements orthodihydroxyles (éventuellement présents sur le noyau A et/ou B) des flavonoïdes. Ces composés présentent une absorbance maximale à 430nm. Mode opératoire 1.5 ml du méthanol est ajouté à 0.5ml de la solution de l’échantillon de concentration 1mg/ml. Ensuite, nous avons ajouté 0.1ml de la solution de AlCl3 à 10%, 0.1ml d’acétate de sodium 1M et 2.8ml d’eau ultra pure (bidistillée). Le mélange est agité vigoureusement puis laissé pendant 30 minutes à l’obscurité avant de lire la densité optique à 430nm. Calcul de la concentration La teneur en flavonoïdes totaux est calculée à partir de l’équation d’une courbe d’étalonnage de quercétine (0.1mg/ml) réalisée préalablement dans les mêmes conditions avec six nivaux de concentration (Figure 12). Les teneurs en flavonoides totaux sont exprimées en mg d’équivalent quercétine par gramme de matière végétale sèche (mg EQ/g Ms) ou en mg d’équivalent quercétine par gramme d’extrait (mg EQ/g extrait).
Dosage des tanins condensés
Principe
Le dosage des tanins condensés a été réalisé par la méthode décrite par Julkunen-Titto, (1985) utilisant la vaniline. Cette dernière réagit avec les flavan 3-ols libres et l’unité terminale des proanthocyanidines donnant une coloration rouge dont l’intensité est proportionnelle au taux de flavanols présents dans le milieu et qui représente un maximum d’absorption à 500nm de longueur d’onde. Mode opératoire Nous avons procédé aux étapes suivantes: Préparer deux séries de tubes à essai (deux tubes dans chaque série). 1ml de la solution d’échantillon de concentration 1mg/ml a été introduit dans un tube de chacune des deux séries. Ajouter 5 ml de la solution vanilline à 1%, HCl à 8% (réactif de l’analyse) dans chacun des tubes de la première série à 1 minute d’intervalle. Ajouter 5 ml de la solution HCl à 4% dans chacun des tubes de la deuxième série à 1 minute d’intervalle. Les tubes sont ensuite introduits au bain marie à 30°C pendant 20 min. Lire les DO à 500nm en respectant l’intervalle d’une minute. Calcul de la concentration La teneur en tanins condensés est calculée à partir de l’équation de la courbe d’étalonnage de catéchine (0.3mg/ml). Cette courbe a été réalisée dans les mêmes conditions avec six niveaux de concentration (Figure 13). Les teneurs en tanins sont exprimées en mg de catéchine par gramme d’extrait (mg catéchine/g extrait).
Dosage des polyphénols totaux
Le dosage des composés phénoliques a été effectué selon la méthode de Wolfe et al., (2003), utilisant le réactif de Folin-Ciocalteau. L’oxydation des phénols, réduit ce réactif en un composé de couleur bleue, l’intensité de la couleur est proportionnelle au taux des composés phénoliques oxydés. Matériel et méthodes 40 Mode opératoire 1.5 ml de réactif Folin-Ciocalteau dilué 10× est ajouté à 200µl de la solution d’échantillon de concentration 1mg/ml. Le mélange est agité vigoureusement puis incuber à l’obscurité pendant 5min à 25ºC. Ensuite, 1.5ml de carbonate de sodium Na2CO3 (60g/l) est ajouté. Le mélange est incuber à l’obscurité pendant 90min à 20ºC avant de lire la densité optique à 725nm. Calcule de la concentration La teneur en polyphénols totaux est calculée à partir de l’équation de la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (0.2mg/ml). Cette courbe a été réalisée dans les mêmes conditions avec cinq niveaux de concentration (Figure14). Les teneurs en polyphénols totaux sont exprimées en mg équivalent d’acide gallique par 100 gramme d’extrait (mg EAG/100g extrait).
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