Méthode 

Prélèvement

 Tous les prélèvements étaient réalisés par nous même.
 Nos patients étaient tous à jeun et en repos de 15 minutes.
 Après confrontation des numéros inscrits sur le tube et ceux sur le bulletin d’analyse, on rassurait notre patient en lui expliquant le geste de prélèvement à faire.
 Le site de ponction était la veine du pli du coude pour tous nos patients.
 On désinfectait la zone de ponction à l’aide d’un coton imbibé d’alcool 70°.
 Un garrot peu serré a été mis pour mieux visualiser la veine et a été rapidement enlevé après l’écoulement des premières gouttes de sang.
 Les aiguilles qu’on a utilisé étaient de marque Venoject et de diamètres 21 G.
 Après la ponction, le prélèvement veineux était effectué dans des tubes contenant l’anticoagulant citrate trisodique 0,105M .ces tubes sont fournies par les laboratoires Beckton Dickinson.
 Le tube a été rempli en 2éme position ou après un tube de purge en respectant un volume de 9 ml de sang pour 1 ml d’anticoagulant et en le remuant doucement.
 Une fois le prélèvement réalisé, une centrifugation immédiate pendant 10 minutes à 4000 tours /min a été effectuée afin d’obtenir un plasma pauvre en plaquettes.
 Le prélèvement a été ensuite conservé sur la paillasse du laboratoire climatisé (20- 25°C).

Le déroulement de l’étude

 Nous avons réalisé sur chaque échantillon un dosage de TP et de TCK à une heure, deux heures, trois heures et quatre heures après le prélèvement.
 Nous avons ensuite comparé les variations des valeurs de TP et de TCK à ces différents temps pour chaque échantillon.

Les techniques utilisées 

Deux tests (TP, TCK) sont réalisés à chaque heure après le prélèvement pendant 4 heures (à la première heure, à la deuxième heure, à la troisième heure et à la quatrième heure).
→ Temps de céphaline avec activateur (kaolin) TCK :
Principe :
– Il s’agit de mesurer à 37ºC le temps de coagulation d’un plasma pauvre en plaquettes, citraté et recalcifié en présence de phospholipides (céphaline), de Calcium et d’activateurde contact (Kaolin).

Réactifs 

Les réactifs utilisés sont fournis par le fabricant Stago, Asnières, France
– CK Prest
– Cacl2 0,025M
– Plasma pur
– Sérum de contrôle (normal et pathologique)

Technique 

– En position d’incubation : distribuer 100 μl de plasma pauvre en plaquettes et 100 μl de réactif CK Prest. Laisser incuber pendant 180 secondes.
– En position de mesure : quand le signal sonore retentit, déplacer la barrette en position de mesure et amorcer la pipette du réactif déclenchant le CaCl2
– Afin de rendre des résultats fiables, et pour chaque patient la technique est reprise deux fois dans deux cuves successives et l’appareil sauvegarde les valeurs dont l’écart est inférieur à 10%.

Résultats 

– Les valeurs de références du laboratoire pour les TCK sont : TCK normal (27 – 35 sec)
Le TCK est allongé lorsque le rapport TCK malade /TCK témoin > 1,2 (chez l’adulte)

Appareil d’analyses des échantillons 

Coagulométre start 4 Diagnostica 

Le Start® est un analyseur de l’hémostase de table avec une méthode brevetée Stago de détection des caillots électromécaniques (viscosité à base de système de détection).
Cette méthode élimine les interférences provenant des substances lipémiques, ictériques ou d’autres échantillons optiquement denses ou des réactifs.
Quatre stations d’incubation indépendamment chronométrés, reliés électroniquement à une pipette multiple, de 40 caractères d’affichage à cristaux liquides et d’une imprimante thermique interne.
Le principe consiste à mesurer le temps de coagulation du plasma échantillon grâce à la variation d’amplitude d’une bille soumise à l’action d’un champ électromagnétique alternatif.
Quand la viscosité de la préparation augmente sous l’effet de l’activation in vitro de la coagulation, l’amplitude des oscillations de la bille diminue [27].
Un algorithme de calcul utilise ces variations d’amplitudes pour déterminer le temps de stabilisation de la bille correspondant au temps de coagulation (Figure 2).

Données pré analytiques 

Selon les indications, un bilan pré opératoire était demandé chez 22 patients (soit 73%), 6 patients (soit 20%) étaient reçus dans le cadre du suivi d’un traitement anticoagulant par les AVK et 2 patients (soit 7%) étaient reçus pour un syndrome hémorragique (Tableau III).
Selon le traitement reçu, 7 patients (soit 23%) étaient sous traitement anti vitamine K, 8 patients (soit 27 %) étaient sous un autre type de traitement n’influençant pas le TP ou le TCK, 15 patients (soit 50%) n’étaient sous aucun traitement. Aucun patient n’était sous traitement à l’héparine. (Tableau IV).

L’analyse des valeurs de TP

Evaluation statique de la distribution des valeurs de TP

Pour les 120 valeurs de TP, La moyenne était à 80 ,04 et l’écart type était à 20,71(tableau V).
On a utilisé le Test de Kolmogorov-Smirnov (K-S) pour tester la distribution des valeurs.
L’hypothèse nulle qu’on a suggérée est que la distribution observée des valeurs de TP suit la loi normale.
L’hypothèse alternative était une négation de l’hypothèse nulle.
Le test a trouvé une valeur de p à 0,003. Puisque cette valeur est inférieure à 0,05 on rejette l’hypothèse nulle et on conclut que les valeurs de TP n’ont pas eu une distribution qui suit la loi normale.
Ce diagramme décrit la distribution obsérvée des différentes valeurs de TP ( sous forme de densité ) répartie par classe de 10.
On peut noter que la distribution des valeurs de TP ne suit pas la loi de Gauss.En effet, pour que la loi de Gauss puisse être observable, il faut que les différentes barres suivent l’allure de la courbe ( dite gaussienne) qui figure à l’intérieur de notre diagramme. ( figure 5).

Comparaison des valeurs de TP à H1, H2, H3 et H4 

Pour ceci on a utilisé le Test de Kruskal-Wallis. C’est un test qui compare les médianes.
L’hypothèse nulle qu’on a suggérée est que les médianes observées de H1 à H4 étaient égales.
L’hypothèse alternative était une négation de l’hypothèse nulle.
Le test a donné une valeur de p égal à 0,948. Puisque la valeur de p est supérieure à 0,05 : on a accepté l’hypothèse nulle en concluant qu’il n’y a pas de différence statistiquement significative entre les valeurs de TP aux temps H1, H2, H3 et H4.
La figure 6 montre une représentation graphique sous forme de boite à moustache des valeurs de TP de H1à H4.

Comparaison des variations des valeurs de TP de chaque patient

En comparant les valeurs de TP de chaque patient aux différentes heures de dosage, nous avons trouvé des variations supérieures à 10% des valeurs de TP pour 2 patients / 30 soit 6,6% de tous les patients avec des pourcentages de variations maximaux à 11,40% pour le Patient N°6 et 12,30 pour le patient N° 15 (voir annexe I).
La figure 7 montre le profil de variation des valeurs de TP de ces patients dans les 4 heures et d’autres patients dont les valeurs sont restées stables.

l’analyse des valeurs de TCK 

Evaluation statique de la distribution des valeurs de TCK

L’hypothèse nulle qu’on a suggéré est que la distribution observée des valeurs de TCK suit la loi normale.
L’hypothèse alternative était une négation de l’hypothèse nulle.
Le test de normalité a donné une valeur de p supérieure à 0,05 ce qui signifie que les différentes valeurs de TCK ont eu une distribution normale.

Ce diagramme décrit la distribution obsérvée des différentes valeurs de TCK ( sous forme de densité ) répartie par classe de 10.
On peut noter que la distribution des valeurs de TCK suit la loi de Gauss.

Le test d’hypothèse d’égalité de la variance : Test de Bartlett.

Le test d’analyse des variances de TCK ( ANOVA) 

L’hypothèse nulle suggère que les différentes moyennes sont égales.
L’hypothèse alternative est une négation de l’hypothèse nulle.
Le test a montré qu’il n’y a pas de différences significatives entre les moyennes des valeurs de TCK aux temps H1 ; H2 ; H3 et H4 puisque la valeur de p est supérieure à 0,05 (tableau VIII ) .

Comparaison des variations des valeurs de TCK de chaque patient

En comparant les valeurs de TCK de chaque patient aux différentes heures de dosage, nous avions trouvé que 4 patients /30 soit 13,33% avaient des pourcentages de variation supérieurs à 10%. C’est le cas du patient N°8, N°16, N°18 et N° 27 qui avaient des pourcentages de variation à 14,66, à 11,19 à 11,32 et à 18,42 % respectivement (voir annexe II).
La figure 9 montre le profil de variation des valeurs de TCK de ces patients dans les 4 heures qui suivent le prélèvement.