Technique de microscopie électronique à transmission

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Effet de l’enalapril et du lisinopril sur la morphométrie des testicules :

L’effet in vivo de l’enalapril et du lisinopril a été réalisé par application topique respectivement aux doses 5µg et 10µg/2µl d’acétone sur des chrysalides mâles nouvellement exuviés d’E. kuehniella. Le poids frais et la taille des testicules, ont été déterminés sur des mâles témoins et traités. Les dissections des mâles dés leur émergence adulte permettent de prélever les testicules qui seront immédiatement pesés.
Les résultats obtenus montrent que l’enalapril entraine une réduction très significative (p = 0,002) du poids frais des testicules par rapport aux témoins puisqu’il passe de 0,25 ± 0,02 chez les témoins à 0,15 ± 0,02 chez les traités avec l’enalapril. Alors que le lisinopril réduit le poids frais des testicules d’une marinière significative (p = 0,006) et la comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative. (Tableau 6, Figure 6).
La comparaison des valeurs moyennes obtenues dans les séries traitées révèle que l’enalapril provoque une réduction significative de la longueur (p=0,006) et la largeur (p =0,05) du testicule (Tableau 7, Figure 7). Cependant, le lisinopril provoque une réduction très significative de la longueur (p =0,005) et la largeur (p =0,001) du testicule, la comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative.
Tableau 7 : Effet in vivo de l’enalapril (5µg/2µl) et du lisinopril (10µg/2µl) administrés par application topique à l’émergence des chrysalides mâles sur la longueur (µm) et la largeur (µm) des testicules chez les adultes d’E. kuehniella (m ± s; n= 4).
La comparaison des valeurs moyennes obtenues dans les séries traitées révèle que l’enalapril provoque une réduction significative de la longueur (p=0,006) et la largeur (p =0,05) du testicule (Tableau 7, Figure 7). Cependant, le lisinopril provoque une réduction très significative de la longueur (p =0,005) et la largeur (p =0,001) du testicule, la comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative.
Tableau 7 : Effet in vivo de l’enalapril (5µg/2µl) et du lisinopril (10µg/2µl) administrés par application topique à l’émergence des chrysalides mâles sur la longueur (µm) et la largeur (µm) des testicules chez les adultes d’E. kuehniella (m ± s; n= 4).

Effet de l’enalapril et du lisinopril sur la morphométrie de l’ovaire :

L’effet in vivo de l’enalapril et du lisinopril a été réalisé par application topique respectivement aux doses 5µg et 10µg/2µl d’acétone sur des chrysalides femelles nouvellement exuviées d’E. kuehniella. Le poids frais de l’ovaire, la taille et le volume de l’ovocyte basal, ont été déterminés sur des femelles témoins et traitées. Les dissections des femelles dés leur émergence adulte permettent de prélever les ovaires qui seront dégagées du corps gras et immédiatement pesés.
Les résultats obtenus montrent que l’enalapril entraine une réduction très hautement significative (p = 0,000) du poids frais des ovaires par rapport aux témoins puisqu’il passe de 6,67 ± 0,45 chez les témoins à 4,02 ± 0,38 chez les traitées avec l’enalapril. Alors que le lisinopril réduit le poids frais des ovaires d’une marinière significative (p = 0,007), il passe de 6,67 ± 0,45 chez les témoins à 5,15 ± 0,13 chez les traitées avec le lisinopril, la comparaison des séries traitées entre elles enregistre une différence significative. (P = 0,01) (Tableau 8, Figure 8)
Concernant le nombre d’ovocytes, le tableau 9 et la figure 9 montrent que l’enalapril et le lisinopril entrainent une réduction significative (p < 0,05) du nombre d’ovocytes par pair d’ovaire par rapport aux témoins, la comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative.
Tableau 9 : Effet in vivo de l’enalapril (5µg/2µl) et du lisinopril (10µg/2µl) administrés par application topique à l’émergence des chrysalides femelles sur le nombre d’ovocytes basaux par paire d’ovaire chez les adultes d’E. kuehniella (m ± s; n= 4).
La comparaison des valeurs moyennes obtenues dans les séries traitées révèle que le lisinopril provoque une réduction très significative (p = 0,001) de la longueur de l’ovocyte basal (Tableau 10, Figure 10) et une réduction significative de la largeur de l’ovocyte basal (p = 0,05). Cependant, l’enalapril provoque une réduction très significative (p = 0,003) de la longueur de l’ovocyte basal et aucun effet significatif (p = 0,6) n’a été enregistré sur la largeur de l’ovocyte basal, la comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative.
Tableau 10 : Effet in vivo de l’enalapril (5µg/2µl) et du lisinopril (10µg/2µl) administrés par application topique à l’émergence des chrysalides femelles sur la taille de l’ovocyte basal chez les adultes d’E. kuehniella (m ± s; n= 4).

Effet de l’enalapril et le lisinopril sur l’épaisseur du chorion :

La fin de la vitellogénèse est caractérisée par la formation des enveloppes de l’oeuf (membrane vitelline et chorion sécrétées par les cellules folliculaires (Lafont & Toullec, 1997)). Ces dernières présentent de très nombreux granules denses d’origine golgienne. Elles s’accumulent dans le cytoplasme sécrétant des granules de taille croissante. La sécrétion de ce matériel entraine la formation du chorion (Carcupino & Lucchi, 1995).
L’épaisseur du chorion a été estimée sur des coupes semi-fines de l’ovocyte basal. Les observations au microscope photonique des ovocytes traités par l’enalapril et le lisinopril ne signalent aucun effet significatif (p > 0,05) sur l’épaisseur du chorion des ovocytes basaux. (Tableau 12, Figure 12).
Tableau 12 : Effet in vivo de l’enalapril (5µg/2µl) et du lisinopril (10µg/2µl) administrés par application topique à l’émergence des chrysalides femelles d’E. kuehniella sur l’épaisseur du chorion (µm) de l’ovocyte basal (m ± s; n= 4).

Effet de l’enalapril et du lisinopril sur l’évolution des taux en glucides, lipides et en protéines testiculaires :

Les résultats sont obtenus à partir de la courbe d’étalonnage exprimant l’absorbance en fonction de la quantité de glucose comme standard (Tableau 13, Figure 14). Ils montrent que l’administration de l’enalapril et le lisinopril entraîne une diminution significative (p = 0,01) du taux des glucides testiculaires par rapport aux témoins. La comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative. (Tableau 16, Figure 17)
Les quantités des lipides testiculaires sont estimées à partir de la courbe de référence exprimant l’absorbance en fonction des quantités des lipides standards (Tableau 14, Figure 15). Les résultats ne montrent aucune différence significative entre les témoins et les traités (p > 0,05). (Tableau 16, Figure 17)
L’effet de l’enalapril et du lisinopril sur les taux des protéines testiculaires déterminés à partir de la courbe de référence exprimant l’absorbance en fonction des quantités d’albumine comme protéine standard (Tableau 15, Figure 16). Une réduction très significative (p = 0,003) du taux en protéines a été observée lorsque les chrysalides mâles sont traitées avec l’enalapril et une réduction significative (p = 0,007) après traitement des chrysalides mâles avec le lisinopril. La comparaison des séries traitées entre elles enregistre une différence significative (p = 0,000). (Tableau 16, Figure 17).

Effet de l’enalapril et du lisinopril sur l’évolution des taux en glucides, lipides et en protéines ovariens :

L’étude statistique révèle une augmentation significative des taux de glucides ovariens a été enregistrée chez les insectes traités en comparaison avec les témoins. En effet, chez les témoins on enregistre un taux glucidique de 11.68 ± 1.81 (μg/mg) qui sera significativement (p = 0,01) élevé à 23.16 ± 2.97 chez les séries traitées avec l’enalapril et à 16.93 ± 1.19 chez les séries traitées avec le lisinopril (p = 0,04), et la comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative. (Tableau 17, Fig 18)
D’après les résultats obtenus, on constate que les taux en lipides ovariens sont approximativement égaux chez les séries témoins et traitées, ce qui laisse l’enalapril et le lisinopril sans aucun effet significatif (p > 0,05). (Tableau 17, Figure 18)
Les taux de protéines ovariennes enregistrés après traitement avec l’enalapril et le lisinopril révèlent une augmentation significative (p = 0,04) chez les chrysalides traitées avec l’enalapril et une augmentation très significative (p = 0,003) chez les séries traitées avec le lisinopril par rapport aux témoins. La comparaison des séries traitées entre elles ne présente pas une différence significative. (Tableau 17, Figure 18)

Table des matières

INTRODUCTION
1. MATERIEL ET METHODES
1.1. Présentation du matériel biologique
1.2. Cycle biologique
1.3. Conditions d’élevage
1.4. Présentation de l’insecticide et traitement
1.4.1. L’enalapril
1.4.2. Le lisinopril
1.5. Etude morphométrique
1.6. Technique de microscopie électronique à transmission
1.6.1. La fixation, le rinçage et la post fixation
1.6.2. La déshydratation et l’inclusion
1.6.3. Confection des coupes et coloration
1.7. Etude biochimique
1.7.1. Extraction des métabolites
1.7.2. Dosage des métabolites
1.7.2. 1. Dosage des glucides totaux
1.7.2. 2. Dosage des lipides totaux
1.7.2.3. Dosage des protéines totales
1.7.3. Extraction des acides nucléiques
1.7.4. Dosage des Acides nucléiques
1.7.4.1. Dosage de l’ARN :
1.7.4.2. Dosage de l’ADN
1.8. Dosage immuno-enzymatique des ecdystéroïdes
1.8.1. Extraction des ecdystéroïdes
1.8.2. Principe du dosage des ecdystéroïdes
1.9. Analyse statistique
2. RESULTATS
2.1. Effet de l’enalapril et du lisinopril sur la morphométrie des testicules
2.2. Effet de l’enalapril et du lisinopril sur la morphométrie de l’ovaire
2.3. Effet de l’enalapril et le lisinopril sur l’épaisseur du chorion
2.4. Effet de l’enalapril et du lisinopril sur la composition biochimique des gonades
2.4.1. Effet de l’enalapril et du lisinopril sur l’évolution des taux en glucides, lipides et en protéines testiculaires
2.4.2. Effet de l’enalapril et du lisinopril sur l’évolution des taux en glucides, lipides et en protéines ovariens
2.4.3. Effets de l’enalapril et le lisinopril sur les acides nucléiques
2.5. Effets de l’enalapril et le lisinopril sur la production des ecdystéroïdes
2.5.1. Effets de l’enalapril et le lisinopril sur la production des ecdystéroïdes testiculaires
2.5.2. Effets de l’enalapril et le lisinopril sur la production des ecdystéroïdes ovariennes
3. DISCUSSION
3.1. Effets sur la morphométrie des gonades
3.2. Effet sur l’épaisseur du chorion
3.3. Effet sur le taux des métabolites
3.4. Effets sur le taux des acides nucléiques
3.5. Effet sur les ecdystéroïdes
CONCLUSION ET PERSPECTIVES
RESUME
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
ANNEXE

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