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Mise en evidence de la formation du complexe OPA-spermine en milieux aqueux
PARTIE EXPERIMENTALE
Produits utilisés Nous avons utilisé de la spermine de pureté 99% et de l’orthophtaladéhyde de pureté 97%. Ces deux produits ont été achetés chez Sigma Aldrich (Taufkirchen, Allemagne) et utilisés sans purification supplémentaire. Nous avons également utilisé de l’hydroxyde de sodium (97% m/m), de l’acide chlorhydrique (37% m/m). De l’eau distillée a aussi été utilisée pour préparer toutes les solutions aqueuses nécessaires.
Instrumentation
Pour l’acquisition des spectres d’absorption électronique UV-visible, nous avons utilisé un spectrophotomètre Evolution 300 piloté depuis un ordinateur HP grâce à un logiciel VisionPro. Pour l’ensemble de nos mesures nous avons fixé une vitesse de balayage à 600 nm par minute. Pour les mesures, deux cuves parallélépipédiques en quartz comprenant deux faces polies (trajet optique 1 cm) ont été utilisées. Pour les pesées, nous avons utilisé une balance PPS213 fisher scientific de précision 1 mg. Les mesures de volumes ont effectuées à l’aide de fioles de 10 mL à 100 mL et une micropipette (pipetman) de 1000 µL.
Pour la dissolution des produits et l’homogénéisation des solutions, nous avons utilisé un agitateur magnétique VELP ARE Scientifica muni d’un chauffage thermostaté. Un pHmètre Consort model C6010 nous a servi de mesure de pH. II-A.3. Méthodologie pour la préparation des solutions Des solutions mères de spermine (SPM) et d’orthophtalaldéhyde (OPA) de concentration 10-2 M chacune ont été préparées dans des fioles de 100 mL avec de l’eau distillée. Cependant, il était nécessaire de chauffer légèrement le mélange OPA-eau distillée afin d’obtenir un mélange homogène. A partir de chaque solution mère nous avons procédé à des dilutions successives pour avoir des solutions filles de concentration désirée. Toutes les Mémoire de Master II en CPAEA-FST UCAD-Francis Diaga NDOUR Page 24 fioles contenant les solutions ont été protégées contre la lumière avec du papier aluminium et conservées dans un réfrigérateur jusqu’à leur utilisation.
Détermination de la stœchiométrie du complexe OPA-SPM
Pour déterminer la stœchiométrie du complexe OPA-SPM, nous avons utilisé la méthode des réactifs limitants et celle de Job.
Méthode des réactifs limitants
Cette méthode consiste à fixer la concentration d’un des réactifs et faire varier celle de l’autre dans une gamme de concentrations couvrant la concentration fixée. Après chaque mélange, nous avons enregistré le spectre d’absorption du complexe et nous avons noté la valeur de l’absorbance maximale. Ceci nous a permis d’établir la courbe de variation de l’absorbance (A) du complexe OPA-SPM en fonction de la concentration du réactif variant. Cette courbe nous donne deux droites de pentes différentes et la stœchiométrie est déterminée à partie de l’intersection des droites. II-
Méthode de JOB
Pour vérifier la stœchiométrie de la réaction, nous avons aussi utilisé la méthode de Job. Cette dernière est également connue sous le nom de méthode de variation continue et a été proposée pour la première fois en 1928 [45]. Elle consiste d’abord à préparer des solutions mères d’OPA et de SPM de même concentration. Pour toutes les mesures, la condition principale requise est que le volume du total mélange des solutions équimolaires d’OPA et de SPM doit rester fixe : . Seuls et varient en sens inverse, mais leur somme reste constante. Nous avons défini le rapport ri pour chaque mélange i : ou Pour chaque valeur de , nous avons noté l’absorbance correspondante Ai du complexe OPA-SPM. Les résultats obtenus, nous ont permis de tracer la courbe de Job : Ai = f(ri). L’allure de ce graphe donne toujours une courbe en cloche. Le centre de cette courbe nous permet d’avoir la stœchiométrie de la réaction.
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