Mise au point du test ELISA IgG anti-salive

Mise au point du test ELISA IgG anti-salive

Le test ELISA est réalisé avec des éluas de gouttes de sang récoltées sur buvard, ce qui constituait une nouvelle approche de cette technique. Cette partie vise à montrer que la technique ELISA peut être appliquée au dosage d’Ac à partir de sang total récolté sur papier buvard. Un premier volet de notre travail consistait à rechercher les dilutions optimales pour l’antigène (ici, la salive totale) ou coating et pour les éluas (présence Ac), celles de l’Ac antiIgG humain et de la SBP étant déjà fixées à 1/1000ème (tests précédents faits au laboratoire). Le même éluas d’un individu est testé pour les différentes dilutions. – Pour l’antigène (salive totale), les dilutions 1/100ème et 1/200ème ont été testées. Les résultats (non représentés ici) n’ont montré aucune différence majeure du niveau d’Ac spécifiques (d-DO) détectés entre ces 2 conditions de coating. La dilution 1/200ème a été par la suite retenue. – Quant aux éluas, les dilutions 1/2, 1/4, 1/8 et 1/16ème testées en premier lieu ont montré que pour un même éluas, le niveau d’Ac spécifiques (d-DO) diminuait avec la dilution (données non montrées). Ceci nous a poussé à continuer notre mise au point.

Une 2ème étape consistait alors à évaluer les dilutions d’éluas de l’ordre de 1/8, 1/16 et 1/32ème (Fig. 9). Fig. 9 : Variations du niveau des Ac IgG anti-salive en fonction de la dilution de l’éluas Cette figure montre que la dilution optimale est ici la dilution 1/16ème pour 2 r aisons principales : elle nous permettait de détecter, dans les 2 groupes, un niveau d’Ac spécifiques (d-DO) similaire à celui obtenu avec la dilution 1/8ème, et un niveau d’Ac plus important que celui obtenu avec le 1/32ème. – une réponse non spécifique (Ag-) beaucoup plus faible que celle obtenue avec la dilution 1/8ème et presque identique à celle qu’a donnée la 1/32ème. Cependant, en s’apercevant que la réponse non spécifique (Ag-) chez les «AM» était plus faible pour la dilution 1/32ème avec pourtant sensiblement le même niveau d’Ac spécifiques, l’idée de tester une dilution comprise entre 1/16 et 1/32ème s’est imposée. Ainsi, les dilutions des éluas au 1/16ème (qui était choisie : Fig. 9) et au 1/20ème ont été testé chez les mêmes individus.

 Evaluation des réponses IgG anti-salive entre les groupes «Sans Moustiquaire» et «Avec moustiquaire»

Le dosage des IgG anti-salive d’An. gambiae a été obtenu par test ELISA dont la standardisation consistait l’objectif de nos précédents travaux (voir III-2) et le mode opératoire développé dans la partie (II-Matériels et Méthode, voir II-3-3) de notre étude. Les résultats de ce dosage sont présentés ici en 2 parties : – partie 1 : comparaisons entre «AM» et «SM» de Mars 2005 à Janvier 2006 – partie 2 : évolution de la réponse IgG chez «SM» après la mise en place des moustiquaires en Février 2006 III-3-1- Comparaisons IgG anti-salive entre groupes «Sans Moustiquaire» et «Avec moustiquaire» : 

Evolution comparée des IgG anti-salive en fonction de la saison. Les dosages d’IgG anti-salive totale d’An. gambiae chez les mêmes individus nous ont permis de suivre l’évolution, dans les 2 groupes, de la réponse Ac spécifique durant la période allant de Mars-Avril 2005 à Janvier 2006. Il a été noté que les buvards «AM» de Mars-Avril 2005 n’ont pas été disponibles. Ce suivi a porté sur 108 i ndividus «SM» et 97 i ndividus «AM». Les résultats ci-dessous présentent les valeurs individuelles des d-DO (représentées par les points) et de la médiane par groupe (représentées par les barres horizontales