Méthodes d’exploration des CLL

Dosages ELISA

Il existe quatre principaux types de test ELISA : direct, indirect, compétitif et sandwich. Pour quantifier des CLL dans un échantillon, on utilise un test ELISA « sandwich ».  ELISA sandwich Figure 15. Principe de l’ELISA sandwich La révélation de la réaction est obtenue par le marquage enzymatique de l’anticorps de détection et l’incubation avec le substrat. Le principal avantage de l’ELISA, par rapport aux techniques d’immunoprécipitation en milieu liquide (Turbidimétrie et Néphélémétrie) est une plus grande sensibilité.

L’ELISA permet de mesurer des molécules-cibles dans un grand choix d’échantillons : sérum, plasma, urine, salive, lysats cellulaires, aliments, etc. On ne peut être confronté avec des problèmes de spécificité car on ne « visualise » pas l’antigène, contrairement à une analyse en western-blot ou électrophorèse. On ne peut pas, avec la technique, classique déterminer les informations en relation l’activité d’une molécule ne peut pas être obtenue par cette technique (Hornbeck, 2015)(Lee et al., 2015)(CARDIN et al., 1984)(“ELISA_Handbook.pdf,” n.d.).

II peut exister des variants technologiques en fonction (1) du support d’immobilisation de l’anticorps de capture (supports activables, billes,….) et du marquage de l’anticorps de détection avec d’autres marqueurs que des enzymes. Méthodes d’exploration des CLL 20 B. Dosage en néphélémétrie ou turbidimétrie Les tests se basent sur la formation de complexes entre un anticorps et un antigène spécifique afin d’en connaître le dosage. Les méthodes sont basées sur le principe selon lequel la lumière, passant par un milieu contenant des particules dispersées, est soit absorbée soit dispersée par les complexes.

Les variations de turbidité du milieu sont mesurées à l’aide d’un néphélémètre ou un turbidimètre. Ces appareils possèdent un rayon laser dont le faisceau traverse la cuve où a lieu la réaction antigène/anticorps. Pour la turbidimétrie on mesure la lumière transmise et pour la néphélémétrie, on apprécie la lumière diffractée dans différentes directions (en fonction de l’angle d’observation du faisceau incident variable en fonction de l’automate). La lumière adsorbée ou diffractée est mesurée par des photomultiplicateurs et comparée à des courbes d’étalonnages avec des quantités connues d’antigène. On en déduit la quantité d’antigène présente dans l’échantillon à doser La précipitation de complexes antigène/anticorps en milieu liquide peut permettre un dosage rapide (en quelques minutes) et précis des antigènes. Son avantage est aussi lié à l’absence d’étape de révélation réduisant les interférences liées à des techniques à plusieurs étape. Elle est, cependant, peu sensible.

Electrophorèses

L’électrophorèse des protéines sériques est une technique permettant la séparation des protéines en fractions de mobilité différentes, avec obtention de leurs pourcentages relatifs par rapport à la valeur de protidémie. Couramment utilisée en pratique clinique, cette 22 analyse reflète l’ensemble des protéines sériques. Accompagnée d’un commentaire d’interprétation, elle apporte de nombreux renseignements en particulier sur l’état inflammatoire ou encore nutritionnel, et permet le dépistage et le suivi d’une dysglobulinémie (Feuilloley et al., 1999).

Elle peut être complétée par des examens complémentaires (Immunotypage capillaire et ou immunofixation et/ou dosages spécifiques des protéines, bilan hématologique, exploration rénale ou digestive). Dans le cadre de l’électrophorèse de zone, les protéines sont soumises à un champ électrique sur un support donné (acétate de cellulose ou gel d’agarose), les protéines se déplacent à des vitesses différentes, qui résultent de plusieurs facteurs : – leur mobilité propre, sous l’effet du champ électrique et du tampon, – le courant d’électroendosmose du support, – le courant d’évaporation, – la composition du support.