Mémoire analyse des extraits par chromatographie sur couche mince

Rapport de stage analyse des extraits par chromatographie sur couche mince, tutoriel & guide de travaux pratiques en pdf.

METHODES D’EXTRACTION (MELEK et coll., 2007 ; MANJARY et coll., 2012)

Extraction aqueuse à froid
La poudre végétale est délayée dans l’eau distillée selon le rapport 1/10 (P/V), c’est-à-dire 1 g de poudre pour 10 ml d’eau distillée. Le mélange est homogénéisé par agitation magnétique pendant 3 h à la température ambiante, puis laissé macérer à +4°C durant 12 h.
Le macérat est ensuite filtré sur 4 épaisseurs de gaze après avoir été agité à nouveau pendant 30 min. Le filtrat obtenu est centrifugé à 10 000 tours/min (centrifugeuse Jouan, TH 12) pendant 15 min à la température ambiante. Le culot est écarté et le surnageant est évaporé à sec. Le résidu obtenu constitue l’extrait brut.

Extraction par épuisements successifs
La méthode est basée sur l’affinité des molécules présentes dans le matériel végétal vis-àvis du solvant d’extraction.
Le matériel végétal, sous forme de poudre fine, est soumis à une extraction par épuisements successifs à l’aide de solvants de polarité croissante, à savoir :
 l’hexane, solvant le moins polaire qui permet d’extraire les lipides et d’autres produits apolaires ;  l’acétate d’éthyle (AcOEt) qui extrait les produits peu polaires comme les cardénolides et les composés phénoliques ou les flavonoïdes ;  le méthanol, solvant le plus polaire qui sert à extraire les triterpènes, les stéroïdes, les sucres, les tanins, les quinones et les alcaloïdes.
La poudre de graines entières est délayée dans le premier solvant (rapport 1/10, P/V). Le mélange est agité à la température ambiante pendant 3 h à l’aide d’un agitateur magnétique, laissé décanter pendant 1 h, puis filtré sur papier filtre. L’opération est répétée jusqu’à épuisement du matériel, c’est-à-dire jusqu’à ce que l’extrait soit aussi limpide que le solvant de départ. Les filtrats sont alors rassemblés. Le marc est laissé sécher à l’air libre avant de continuer avec le second solvant, et ainsi de suite. Chaque extrait obtenu est évaporé à sec.

METHODES DE PURIFICATION (KAMOUN, 1987 ; ATHAMENA et coll., 2010)

Fractionnement par l’acétate d’éthyle
a) Principe
Cette méthode d’extraction liquide-liquide est basée sur le transfert d’un ou de plusieurs constituants d’une première phase liquide (la solution aqueuse) vers une seconde phase liquide extractive (le solvant organique) pour laquelle ils ont plus d’affinité.
b) Mode opératoire
L’extrait aqueux à traiter et l’acétate d’éthyle sont mélangés volume à volume dans une ampoule à décanter. Le mélange est agité énergiquement puis laissé décanter jusqu’à l’obtention de deux phases bien distinctes : la phase supérieure organique et la phase inférieure aqueuse. La phase organique est recueillie. Le volume de la phase aqueuse est mesuré puis celle-ci est soumise à deux autres fractionnements. Les trois phases organiques ainsi obtenues sont rassemblées, débarrassées du solvant par évaporation après ajout d’un grand volume d’eau distillée et concentrées jusqu’au volume initial de l’extrait. La phase aqueuse est débarrassée de l’acétate d’éthyle résiduel par évaporation après ajout d’eau distillée.

Fractionnement par le n-butanol
a) Principe
Selon le même principe que précédemment, des substances mises en présence de deux solvants non miscibles et de polarités différentes se séparent en fonction de leur affinité relative visà-vis de ces solvants.
b) Mode opératoire
L’extrait à traiter est mélangé volume à volume avec le n-butanol dans une ampoule à décanter. Après une agitation énergique, le mélange est laissé décanter totalement, donnant 2 phases distinctes. La phase organique (phase supérieure) est recueillie et la phase aqueuse (phase inférieure) dont le volume est mesuré, subit encore deux autres fractionnements successifs. Les trois extraits butanoliques obtenus sont rassemblés, additionnés d’un grand volume d’eau distillée et évaporés pour éliminer le solvant organique. La solution est ramenée au volume initial. Le butanol résiduel de la phase aqueuse est également éliminé par évaporation après ajout d’eau distillée.

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