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L’ÉTUDE CHIMIQUE D’UNE PLANTE CODÉE HYPOTENSIVE ENDÉMIQUE
Préparation de l’extrait hydroalcoolique
100g de plantes sèches broyées tiges et feuille sont extraites avec d’alcool à 80% par chauffage à reflux dans un ballon de 2 l pendant une heure. Après filtration sur Büchner, la solution obtenue a été évaporée sous pression réduite donnant aussi l’extrait hydroalcoolique.
Screening phytochimique
Le but du screening phytochimique est de déterminer qualitativement les différentes familles chimiques présentes dans la plante étudiée. Pour cela, un extrait hydroalcoolique obtenu par chauffage à reflux dans l’éthanol à 80% a été préparé à partir de la drogue.
Les alcaloïdes
Ce terme, qui a été introduit par METSNER W. au début du XIVéme siècle, désigne des substances naturelles réagissant comme des bases. Ces composes de poids moléculaire plus ou moins élevé (exemple 100 à 200 daltons), ont un goût amer et sont caractérisés par la présence d’au moins un atome d’azote cyclique ou non. Exemple : Nicotine N N CH3 Figure 2 : Exemple des alcaloïdes
Macération chlorhydrique
Le résidu d’évaporation à sec est macéré dans 3 ml de HCl 2N puis le mélange est filtré sur papier filtre. Le filtrat est réparti dans 4 tubes à essai dont un a servi de témoin. Trois tests sont effectués : le test de MAYER, le test de WAGNER et le test de DRAGENDORFF. Les deux solutions sont mélangées volume à volume, puis le mélange est additionné de 10g d’acide tartrique et d’eau distillée (qsp 100 ml) Cinq gouttes de chaque réactif spécifique sont ajoutées dans le tube correspondant. La présence d’alcaloïdes dans l’extrait à analyser est révélée par l’apparition d’un précipité ou d’une floculation (DALTON, 1979 ; CORDELL, 1981 ; BRUNETON, 1993).
Test préliminaire
A partir de l’extrait hydroalcoolique précédemment préparé, nous en avons pris un volume équivalent à 10g de plante que nous avons placé dans deux cristallisoirs pour la solution alcoolique. L’alcool est évaporé jusqu’à obtention d’un résidu de consistance sirupeuse. 16 L’extrait, additionnés de 5ml d’une solution HCl 2N, est chauffé dans un bain-marie pendant 3 à 5 mn avec agitation continuelle. Les solutions acides refroidies à la température ambiante, puis additionnées de 0,5 g de NaCl, sont agitées et filtrées. Il n’y avait pas de précipités, mais quand même nous avons lavé le papier filtre avec un volume suffisant d’une solution de HCl 2N. La solution est divisée en trois parties égales dans 3 tubes à essai. Le premier tube sert de témoin. Par contre, le deuxième tube est additionné de 5 gouttes du réactif de Mayer et le troisième de 5 gouttes du réactif de Wagner.
Test de confirmation
Même si les deux premiers sont négatifs, nous avons quand même effectué ce test à titre d’information. L’ extrait hydroalcoolique, équivalent chacun à 10g de plantes sèches broyées en poudre sont traités par une solution de HCl 5% , chauffes pendant 5 mn sous agitation , additionnés d’un volume de NH4OH à 25% jusqu’à pH = 9 , puis extraits trois fois par de chloroforme . Les solutions chloroformiques sont combinées, puis évaporées à sec. Les résidus , additionnés de 5 ml de HCl 2N puis agités avec une tige de verre , sont chauffés dans un bain-marie pendant 3 mn , puis refroidis et filtrés . Le filtrat est ensuite soumis au test de Mayer et Wagner.
Les Flavonoïdes et leuconthocyanes
Ce sont de composés polyphénoliques caractérisés par un enchaînement C6-C3-C6 , cette famille comporte diverses sous-classe : les flavones , les flavanes , les flavanols, les flavononols , les anthocyanes , etc . 17 Figure 3 : Composées flavonoïdes
Flavonoïdes : Test de WILSTATER (Test à la cyanidine)
Le résidu est repris dans de l’éthanol 80% puis filtré sur papier filtre. Le filtrat est ensuite réparti dans 4 tubes à essai dont un sert de témoin. Dans le premier tube, 0,5 ml d’acide chlorhydrique concentré et 2 tournures de magnésium sont ajoutés. Dans le deuxième tube, en plus des réactifs précédents, 1 ml d’eau distillée et 1 ml d’alcool isomylique sont ajoutés. Le virage de coloration ci-après indique la présence de flavonoïdes : au rouge pour les flavones au rouge violacé pour les flavonones au pourpre pour les flavonols
Leuconthocyanes : Test de BATE-SMITH
Dans le troisième tube : 0,5 ml d’acide chlorhydrique concentré est ajouté , puis le tout est porté au bain-marie bouillant pendant 30 min . La présence de leuconthocyanes est indiquée par l’apparition d’une coloration rouge violette après refroidissement (FOND et Coll , 1977 ) .
Les tanins et les polyphénols
Ce sont des composés phénoliques condensés. Toutefois il existe deux types de tanins : Tanins galliques appelés aussi tanins hydrolysables ; qui sont des esters d’oses en général : de glucose et d’acides phénoliques.
I. INTRODUCTION GENERALE |
