Evaluation de l’activité anesthésique locale de l’extrait SAC-Pa chez le rat

Etude de l’activité de l’extrait SAC-Pa sur le réflexe cornéen des rats

La propriété anesthésique locale de surface d’un produit peut être mise en évidence par sa capacité d’inhiber le réflexe occulopalpébral. Ce réflexe a été provoqué en touchant d’une manière répétée l’œil de l’animal. Pour mettre en évidence cette propriété de surface de l’extrait, il a été instillé directement dans l’œil de l’animal.
Les rats ont été répartis en 5 lots de 5 animaux: un lot témoin, un lot de référence et 3 lots traités avec l’extrait. Ils ont été mis dans une boîte de contention une heure avant le test. Leurs cils ainsi que les poils situés aux alentours d’un de leurs yeux ont été coupés pour faciliter la manipulation . L’existence d’un réflexe occulopalpébral normal a été vérifiée avant l’instillation de l’extrait en touchant la cornée à l’aide d’un poil de rat monté et collé sur une tige en bois: le contact du poil avec la cornée provoque un réflexe occulopalpébral se traduisant par une fermeture rapide des paupières .
Ensuite, deux gouttes du produit à tester ont été instillées directement dans le sac occulopalpébral de l’œil droit des rats tandis que l’œil gauche a servi de contrôle. Le lot témoin a reçu du Tween 80-H2O (5 :95) qui a servi de solvant, le lot de référence a reçu de la Lidocaïne (2%), et les trois derniers lots ont reçu respectivement 50, 100 et 200 mg/ml de l’extrait SAC-Pa.
Une minute après l’instillation du produit à tester, une première série de toucher de l’œil a été effectuée à l’aide du poil de rat jusqu’à l’obtention d’un réflexe occulopalpébral sans dépasser les 60 secondes par série. Cinq minutes après cette première série, une deuxième série a été effectuée et ensuite les autres séries, toutes les 5 minutes pendant 60 minutes .
Le nombre de toucher nécessaires pour obtenir la première fermeture de l’œil a été noté pour chaque série.

Etude de l’activité de l’extrait SAC-Pa sur le réflexe peaucier des rats

L’activité anesthésique locale d’infiltration a été mise en évidence par la capacité de l’extrait à inhiber le réflexe peaucier. Une piqûre ou un grattement provoque la formation d’un bouton dermique et un frisson .
Une injection intradermique de l’extrait au niveau du dos rasé des rats a été effectuée pour le réflexe peaucier.
Les rats ont été répartis en 5 lots de 5 animaux: un lot témoin, un lot de référence et 3 lots traités avec l’extrait. La région lombaire des animaux a été rasée 18h avant la manipulation, chaque animal a été ensuite mis dans une boîte de contention 1h avant la manipulation. L’existence d’un réflexe peaucier a été vérifiée avant d’injecter le produit en grattant la région lombaire des rats à l’aide d’une aiguille montée. Puis, les produits ont été injectés dans le derme de la région lombaire du dos de chaque rat dans un volume de 1,4 ml/kg . Du Tween80-H2O (5 : 95) pour le lot témoin, de la Lidocaïne (2%) chez les animaux du lot de référence et 50, 100 et 200 mg/kg de l’extrait SAC-Pa respectivement chez les animaux des trois derniers lots. Les zones qui ont reçu les différents produits ont été stimulées toutes les 3s par des piqûres à l’aide d’une aiguille montée jusqu’à l’obtention d’un réflexe peaucier en ne dépassant pas 6 piqûres. Cette série a été répétée toutes les 5 minutes pendant 30 minutes. Le nombre de piqûres nécessaires pour obtenir le premier frémissement par série a été noté.

Etude de l’activité de l’extrait SAC-Pa sur le temps de retirement de la queue des rats

Un anesthésique local possède la capacité d’inhiber la douleur locale. Une injection bilatérale sous cutanée du produit à la racine de la queue des rats a été effectuée pour le mettre en évidence . Un test préliminaire a été effectué pour sélectionner les animaux à utiliser dans ce test. Les rats ont été placés un à un dans une tube cylindrique en plastique (figure 2), en laissant sortir leur queue. Deux centimètres de l’extrémité de la queue ont été immergées dans l’eau chaude maintenue à la température de 55° C . Le temps maximal d’immersion de la queue de chaque rat a été fixé à 30 s pour éviter des dommages tissulaires. Seuls les rats qui ont eu un temps de réaction (retirement de la queue de l’eau chaude) inférieur ou égal à 3s ont été sélectionnés pour le test .
Les animaux sélectionnés ont été ensuite répartis en 4 lots de 5 rats, un lot témoin, un lot de référence et deux lots testés avec l’extrait. Les produits à tester ont été ensuite injectés sous la peau de la queue à deux centimètres de la racine à raison de 1,4 ml/kg (CARON S., 2013). Le lot témoin a reçu du Tween 80-H2O (5 : 95), le lot de référence de la Lidocaïne (2%) et les animaux des deux lots testés ont reçu respectivement 50 et 100 mg/kg d’extrait. Puis les animaux ont été placés à nouveau un à un dans la tube cylindrique en immergeant deux centimètres de la queue dans l’eau chaude jusqu’ à ce qu’ils la retirent. Cette manipulation a été répétée aux 15, 30, 45, 60 et 120éme minutes après injection des produits. Le temps que met le rat avant de retirer sa queue de l’eau chaude a été chronométré et noté pour chaque rat.

Etude de l’effet de l’extrait SAC-Pa sur une préparation nerf-muscle gastrocnémien de grenouille

La grenouille a été décérébrée puis despinalisée à l’aide d’une aiguille montée. La peau depuis le tendon jusqu’à la cuisse a été ouverte pour isoler le nerf sciatique et le muscle gastrocnémien. Ensuite 4 lots de 3 nerf-muscles ont été testés, un lot témoin, un lot de référence et deux lots testés avec l’extrait aux concentrations de 25 mg/ml et 50 mg/ml. La grenouille a été placée sur une planche à dissection en attachant le muscle gastrocnémien à un stylet. Le nerf a été accroché à deux électrodes de stimulation reliées à un chariot de Dubois Raymond. Pendant l’expérience, le nerf a été humidifié avec du liquide de Ringer (NaCl=112,06 mM ; KCl=1,89 mM ; CaCl2=1,09 mM ; NaHCO3=2,38 mM) pour qu’il reste humide. Ensuite 5 gouttes de produit à tester: de la Lidocaïne (2%) pour le lot de référence, 25 mg/ml et 50 mg/ml de l’extrait pour les lots testés, et du Ringer pour le lot témoin, ont été déposées sur le nerf .
Après 10 minutes de contact avec les différents produits, le nerf sciatique a été stimulé électriquement avec un courant produit par le chariot de Dubois Reymond. Les deux bobines du chariot de Dubois Reymond ont été rapprochées jusqu’à obtenir une contraction du muscle gastrocnémien innervé par le nerf sciatique . L’intensité de stimulation étant inversement proportionnelle à la distance entre les deux bobines et cette intensité correspond à la rhéobase. Pour chaque contraction, la distance entre les deux bobines qui a provoqué la contraction du muscle gastrocnémien a été mesurée et notée. La rhéobase correspond à l’inverse de cette distance.

Etude de l’effet de l’extrait SAC-Pa sur une préparation de nerf sciatique isolé de grenouille

Ensuite, après la contraction musculaire le nerf sciatique a été prélevé et enlevé pour mesurer la vitesse de conduction de l’influx nerveux en présence et en absence de l’extrait. Les nerfs encore imbibés de produit ont été monté un par un dans la cuve à nerf isolé contenant quatre électrodes, dont deux stimulatrices reliées à un module générateur de courant et deux réceptrices reliées à un module électrophysiologique «Orphy GTI (M10521)» lui-même relié à un ordinateur pour enregistrer les amplitudes. La tension de stimulation a été fixée à 5mV avec un nombre de stimulation unique dont la durée a été de 80 ms.
Après chaque stimulation le temps de latence a été mesuré. Une augmentation du temps de latence traduit une diminution de la vitesse de conduction.

Table des matières

INTRODUCTION
MATERIELS ET METHODES
A. ETUDES PHYTOCHIMIQUES
1. Méthode d’extraction
2. Criblage phytochimique
B. TESTS BIOLOGIQUES
1. Animaux d’expérimentation
2. Préparation des produis à tester
3. Etude in vivo de l’activité anesthésique locale de l’extrait SAC-Pa chez le rat
a. Etude de l’activité de l’extrait SAC-Pa sur le réflexe cornéen des rats
b. Etude de l’activité de l’extrait SAC-Pa sur le réflexe peaucier des rats
c. Etude de l’activité de l’extrait SAC-Pa sur le temps de retirement de la queue des rats
4. Etude de l’activité anesthésique locale de l’extrait SAC-Pa sur la préparation nerf-muscle gastrocnémien et nerf sciatique isolé d’une grenouille
a. Etude de l’effet de l’extrait SAC-Pa sur la préparation nerf-muscle gastrocnémien de grenouille
b. Etude de l’effet de l’extrait SAC-Pa sur la préparation nerf sciatique isolé de grenouille
5. Analyse et expression des résultats
RESULTATS
A. RESULTAS PHYTOCHIMIQUES
1. Résultat de l’extraction
2. Les familles chimiques présentes dans l’extrait SAC-Pa
B. TESTS BIOLOGIQUES
1. Effet anesthésique local de l’extrait SAC-Pa in vivo
a. Effet de l’extrait SAC-Pa sur le réflexe cornéen des rats
b. Effet de l’extrait SAC-Pa sur le réflexe peaucier des rats
c. Effet de l’extrait SAC-Pa sur le temps de retirement de la queue des rats
2. Effet de l’extrait sur la préparation nerf muscle et le sciatique isolé de grenouille
a. Effet de l’extrait SAC-Pa sur la préparation nerf-muscle gastrocnémien de grenouille
b. l’effet de l’extrait SAC-Pa sur la préparation nerf sciatique isolé de grenouille
DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES