Etude expérimentale de l’eléctrophorése des protéines sériques sur gel d’agarose

Matériels et méthodes

Les animaux

Pour cette étude, nous nous sommes intéressés aux espèces canine, féline, équine, bovine et ovine. Les animaux retenus présentent un examen clinique normal et sont considérés comme des sujets sains.
Dans l’espèce canine, les chiens sont des Beagles appartenant à l’unité pédagogique de la Reproduction de l’Ecole Nationale Vétérinaire d’Alfort. Six individus sont retenus. Ce sont des femelles âgées de 2 à 10 ans.
Les chats sont tous des chats de race commune présentés au service de chirurgie pour y subir une stérilisation de convenance. Onze individus sont retenus. Il s’agit de cinq mâles et six femelles âgés de 10 mois à 6 ans.
Les chevaux sont des Selles Français sains prélevés pour les besoins d’un autre travail (CORNUS, 2010). Nous avons utilisé douze sérums différents provenant de neuf mâles et trois femelles âgés de 2 à 20 ans.
Les bovins sont des Prim’holstein, race laitière, mises à notre disposition par M. Lefort éleveur à Arvillers (Somme). Douze individus ont été prélevés. Il s’agit de douze femelles âgées de 3 à 7 ans.
Les moutons sont des Suffolks provenant de l’EARL Agri-Smessaert à Catigny (Oise).
Douze individus ont été prélevés : onze femelles unet mâle âgés de 1 à 8 ans.

Prélèvements des animaux

On prélève 5mL de sang sur tube sec au niveau de al veine jugulaire chez toutes ces espèces sauf les bovins, chez lesquels le prélèvement a lieu au niveau de la veine caudale. Les prélèvements sont laissés au repos pendant 20 minutes pour que s’effectue la coagulation. Après centrifugation à 3000 tours par minute pendant 10 minutes, on obtient les sérums pour la réalisation des électrophorèses.
Les sérums présentant un aspect trop hémolysé oupalescento sont écartés car les résultats de leur électrophorèse sont faussés parpparition de complexe inter-protéique (ex : complexe haptoglobine-hémoglobine lors de sérums hémolysé visible par un pic au niveau des α2-globulines).
Avant de réaliser les électrophorèses, on pratiquesur chaque sérum un dosage des protéines totales. Ce dosage est réalisé grâce à unautomate de biochimie Prestige 24I de Tokyo Boeki par une méthode colorimétrique de Biuret. Les kits de réactifs sont des kits Spinreact Total Protein® fournis par Kitvia.

Electrophorèse en gel d’agarose et réalisation de l’électrophorégramme

On réalise les électrophorèses sur le système manuel SAS-M1 (Helena Biosciences, Gateshead, Royaume-Uni) alimenté par un générateurde courant Apelex PS 503 (Apelex, Massy, France) présenté sur la figure 5.
Figure 5 : Cuve à électrophorèse manuel SAS-M1 et son générateur Apelex PS 503.
Les gels de migration utilisés sont les gels d’agarose SAS – Serum Protein (Helena Biosciences) présentés sur la figure 6.
Figure 6 : Gel de migration SAS – Serum Protein.
a : ponts d’agarose, b : zone de migration
Les sérums sont dilués. A l’aide d’un masque fenêtré appliqué sur le centre du gel, on dépose 5 microlitres d’échantillons. On peut déposer au maximum six échantillons sur le gel. Puis le gel est placé sur le bloc réfrigérant de la cuve d’électrophorèse et les électrodes du couvercle sont mises en contact avec les ponts d’agarose en refermant le système comme le montre la figure 7.