Etude de l’activité de l’extrait « R.PRO 012

Etude de l’activité de l’extrait « R.PRO 012 » sur la goutte chez la souris

Etude phytochimique

Extraction : Des feuilles d’une plante appartenant à la Famille des ASCLEPIADACEAE utilisée contre la goutte ont été récoltées dans la région Anosy dans le sud de Madagascar au mois de décembre 2014. Elles ont été séchées à l’ombre dans un endroit aéré pendant 3 mois ; ensuite, broyées à l’aide d’un broyeur à marteau au Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC). Cinq cent grammes de la poudre ainsi obtenue ont été macérés dans un mélange éthanol – eau (60 : 40) pendant 5 jours à la température ambiante. Le macérât a ensuite été filtré sur un papier Wattman et le filtrat a été évaporé à sec sous vide à la température de 80° C à l’aide d’un rotavapor Evapotec®.

Etudes pharmacologiques

Dans la médecine traditionnelle, cette plante est utilisée dans le traitement de la crise de goutte. Pour étudier cette activité, des tests in vivo ont été effectués chez des souris rendues hyperuricémiques expérimentalement, afin de déterminer si l’extrait « R.PRO 012 » est capable de réduire l’uricémie, et comment il réduit cette uricémie.

Préparation des animaux : L’acide urique n’existe pas naturellement chez les souris parce qu’elles possèdent l’uricase, une enzyme qui catalyse l’acide urique en allantoïne (EA H.K. 2011). Pour provoquer l’hyperuricémie chez la souris, de l’oxonate de potassium, un inhibiteur de cette enzyme, a été injecté par voie intra péritonéale (HO S. T. et coll., 2000 ; HUANG C. et coll., 2008). Des souris mâles de race SWISS (Figure 9) âgées de 8 semaines et pesant en moyenne 30 g ont été utilisées. Elles ont été élevées dans l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC), dans des conditions stables : une alternance de 12 heures de lumière et 12 heures d’obscurité, à la température de 20 °C en moyenne. Chaque souris a reçu 15 g de provende LFL par jour pour 100 g de poids corporel et de l’eau à volonté (HUANG C. et coll., 2008).

Etude de l’activité de l’extrait « R.PRO 012 » sur l’uricémie

L’objectif de cette expérience a été d’étudier l’effet de l’extrait «R. PRO 012» chez des souris rendues expérimentalement hyperuricémiques. Vingt souris mâles de race SWISS, élevées dans l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC) pesant 30 g environ ont été utilisées, elles ont été réparties en 4 lots de 5 souris : le premier lot (lot 1) a été utilisé comme témoin et a reçu 10 ml/kg d’eau distillée. Le deuxième, troisième et quatrième lot ont reçu l’extrait à différentes doses. Au temps t0, les souris ont eu accès à la nourriture : 10 g de provende LFL pour 100 g de poids corporel et de l’eau à volonté.

Au temps t1, c’est-à-dire 1 h après la prise de nourriture, 200 mg/kg d’oxonate de potassium Sigma-Aldrich ont été administrés chez toutes les souris par voie intrapéritonéale pour augmenter l’uricémie. Au temps t2, c’est-à-dire 1 h après l’administration de l’oxonate de potassium: le premier lot qui a servi de témoin a reçu de l’eau distillée. Le deuxième, troisième et quatrième lot ont reçu l’extrait à la dose de 50 mg/kg, 100 mg/kg et 200 mg/kg respectivement. L’eau distillée, ainsi que l’extrait ont été administrés par voie intrapéritonéale dans un volume de 10 ml/kg pour que le produit soit directement dans la circulation sanguine (VOGEL H. G., 2002 ; 2006).

Etude de l’activité de l’extrait « R.PRO 012 » sur l’uricosurie

Cette étude a pour objectif d’étudier l’effet sur l’élimination rénale de l’acide urique chez les souris rendues hyperuricémiques.
Vingt souris mâles de race SWISS, pesant 30 g environ et âgées de 8 semaines, élevées dans l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, Pharmacocinétique et Cosmétologie (LPGPC) ont été utilisées. Les vingt souris réparties en 4 lots ont été nourries avec du jus de viande de bœuf mélangé à une solution de NaCl 0,9 ‰ par gavage dans un volume de 50 ml/kg. Ce jus est composé de 250 g de viande de bœuf + 250 ml d’eau + solution de NaCl 0,9‰, il a été utilisée comme source de purine (VOGEL H. G., 2002 ; 2006).

Elles ont ensuite été réparties en 4 lots de 5 souris : le premier lot qui a servi de témoin a reçu 50 ml/kg du jus de viande de bœuf, le deuxième, troisième et le quatrième lot ont reçu 50 ml/kg du jus de viande de bœuf mélangée avec 50 mg/kg, 100 mg/kg et 200 mg/kg d’extrait respectivement. Au temps t1, 200 mg/kg d’oxonate de potassium ont été administrés chez les souris des lots 2, 3 et 4 par voie intrapéritonéale à raison de 10 ml/kg pour provoquer l’hyperuricémie. Ensuite, les souris ont été placées individuellement dans des cages à métabolisme et leurs urines ont été récoltées. L’échantillon de l’urine récoltée a été centrifugé à 3000 tours/minute pendant 10 minutes, avec une centrifugeuse « EBA 3S ». Puis le surnageant a été récupéré, et dilué au 1/10 avec de l’eau distillée et 1ml de réactif enzymatique (uricase) de marque BIOLAB y a été ajouté. Le réactif a été constitué de 42 µmol/l d’hexacyanoferrate de potassium, ≥ 450 U/l de peroxydase, 0,150 mmol/l d’amino-antipyrine, ≥ 120 U/l d’uricase.

Table des matières

I – INTRODUCTION
II – MATÉRIEL ET MÉTHODES
A- ÉTUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Extraction
2. Criblage phytochimique
B- ÉTUDES PHARMACOLOGIQUES
1. Préparation des animaux
2. Etude de l’activité de l’extrait « R.PRO 012 » sur l’uricémie
3. Etude de l’activité de l’extrait « R.PRO 012 » sur l’uricosurie
C- EXPRÉSSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III – RÉSULTATS
A- PARTIE PHYTOCHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Rendement du criblage phytochimique
B- ÉTUDES PHARMACOLOGIQUES
1. Effet de l’extrait « R.PRO 012 » sur l’uricémie
2. Effet de l’extrait « R.PRO 012 » sur l’uricosurie
IV – DISCUSSION
V – CONCLUSION
VI – RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES