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Préparation de l’extrait
Les feuilles de la plante ont été cueillies au mois d’Août 2017 dans la région de DIANA dans le fokontany de MORAFENO. Elles ont été séchées à l’ombre à la température ambiante, pendant une semaine. Les feuilles sèches ont été découpées en petits morceaux, puis 200 g ont été broyés avec un broyeur à marteau, de marque BROOK CROMPTON SERIES 2000 ©.
Puis la poudre a été macérée dans 3 litres de mélange éthanol-eau (60 : 40), à la température ambiante, pendant 72 heures. Ce macérât a été agité une fois par jour pendant 10 minutes. Après cette période, le macérât a été filtré sur du coton hydrophile, ensuite le filtrat a été versé dans le ballon à fond rond, puis installé avec le distillateur chauffé à la température de 80°C. Ensuite dans un bain-marie à la température de 100°C.
Étude de l’effet de BSR 7 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
Cette manipulation a été réalisée afin d’étudier l’activité de l’extrait sur la diarrhée sécrétoire. Ils ont été répartis en 4 lots de 3 animaux dont 1 lot témoin, et 3 lots traités avec l’extrait BSR 7. Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale, tandis que les animaux des 3 autres lots ont respectivement reçu l’extrait BSR 7 par voie orale aux doses de 100, 200 et 400 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée .
Après 45 minutes, 1 ml d’huile de ricin a été administré par voie orale chez tous les animaux. Puis après 30 minutes, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique, puis exsanguinés en coupant les deux carotides. Une laparotomie a été effectuée, puis leur intestin grêle a été prélevé, et leur contenu a été versé dans des récipients puis centrifugé à la vitesse de 3000 tours par minutes, pendant 10 minutes. Ensuite, le surnageant a été récupéré, puis son volume a été mesuré à l’aide d’une éprouvette graduée.
Étude de l’effet de BSR 7 sur la motilité intestinale
Ce test a eu pour but d’étudier l’effet de l’extrait sur la motilité intestinale. Cette activité a été observée in vitro sur la contraction de l’iléon isolé de cochon d’Inde provoquée par l’acétylcholine . Le cochon d’Inde a été mis à jeun pendant 19 heures, ensuite il a été anesthésié par inhalation d’étherdiéthylique, puis exsanguiné en coupant ses deux carotides. Puis, une laparotomie a été effectuée et l’iléon a été prélevé. Cet organe a été placé dans une boîte de Pétri contenant du liquide de survie de Tyrode maintenu à la température ambiante et aéré avec de l’air. L’organe a ensuite été découpé en morceaux de 3 cm de long, puis suspendu dans une cuve à organe de 20 ml, contenant une solution de Tyrode, maintenue à la température de 37 °C, et aérée avec de l’air à l’aide d’un aérateur électrique (AIR PUMP-KOKO-108). Une de ses extrémités a été fixée au fond de la cuve, tandis que l’autre extrémité a été reliée à un capteur isométrique (Statham Gould) sous une tension de 1,5 g, à l’aide d’un fil de coton inextensible.
L’organe a été laissé s’équilibrer dans la cuve pendant 45 minutes. Pendant cette période, la solution de survie a été changée toutes les 15 minutes. Ensuite, l’organe a été sensibilisé avec de l’acétylcholine à la concentration de 10-3 M dans le bain. La préparation a de nouveau été rincée, puis laissée se stabiliser pendant 45 minutes. L’acétylcholine a ensuite été injectée dans le bain, d’une manière cumulative jusqu’à l’obtention de la contraction maximale de l’organe. Au plateau de la contraction, l’extrait a été injecté dans le bain à l’aide d’une micropipette, de manière cumulative jusqu’au relâchement total de l’iléon isolé. La somme des volumes de solutions injectées dans le bain n’a pas excédé 10 % du volume du bain.
Étude du mécanisme d’action de BSR 7
Ce travail a eu pour objectif d’étudier l’activité de l’extrait BSR 7 vis-à-vis de l’acétylcholine. Afin d’atteindre cet objectif, l’iléon isolé a été incubé dans un bain contenant de l’extrait avant d’injecter l’acétylcholine dans la cuve à organe.
L’iléon isolé de cochon d’Inde a été placé dans une cuve à organe isolé, contenant une solution de Tyrode maintenue à la température de 37 °C et aérée avec de l’air à l’aide d’un aérateur électrique. Après l’équilibration et la sensibilisation, l’organe a été incubé, pendant 10 minutes, dans un bain contenant de l’extrait à la concentration de 100 µg/ml avant d’injecter l’acétylcholine dans le bain de manière cumulative, jusqu’à l’obtention de la contraction maximale de l’organe. Ensuite, la préparation a été rincée, puis laissée se stabiliser et il a de nouveau été incubé dans un bain contenant de l’extrait à la concentration de 200 µg/ml avant de le contracter avec l’acétylcholine. Les contractions de l’organe ont été enregistrées, puis l’amplitude de la contraction a été mesurée. L’amplitude maximale provoquée par l’acétylcholine seule a été considérée comme la contraction 100 %, puis les contractions obtenues en présence de l’extrait ont été exprimées par rapport à cette amplitude. Ces amplitudes ont été rapportées sur une échelle semi logarithmique en fonction de la concentration de l’acétylcholine dans le bain, et la CE50 de celle-ci en absence et en présence de l’extrait a été déterminée graphiquement.
Table des matières
I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. Partie chimique
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. Partie pharmacologique
1. Animaux d’expérimentation
2. Étude de l’effet de BSR 7 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
3. Étude de l’effet de BSR 7 sur la motilité intestinale
4. Étude du mécanisme d’action de BSR 7
III. RÉSULTATS
A. Partie chimique
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. Partie pharmacologique
1. Effet de l’extrait BSR 7 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
2. Effet de BSR 7 sur la motilité intestinale
3. Mécanisme d’action de l’extrait BSR 7
IV. DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
