Etude cytogénétique des anomalies chromosomiques par le test chromatinien de Barr et le caryotype

La chromatine de BARR7 

Le corpuscule de Barr est un composant du noyau des cellules, présent chez les femelles de mammifères. Il a été découvert en 1948 par le Docteur Murray Barr au Canada. Il est également appelé corps chromatinien de BARR ou chromatine sexuelle. C’est de l’hétérochromatine sexuelle appliquée contre la face interne de l’enveloppe nucléaire (figure 1) de la plupart des cellules somatiques chez les femelles de Mammifères. Il correspond à l’un des deux chromosomes X inactivé, indifféremment d’origine maternelle ou paternelle. 

Inactivation du chromosome X

 Cette inactivation de l’X (ou lyonisation) se déroule dans les stades précoces de l’embryogénèse (blastocyste) ; Chez les mammifères, le processus qui consiste pendant l’embryogenèse à réprimer l’expression d’un des deux chromosomes X, en le mettant sous forme d’hétérochromatine facultative (formant le corpuscule de Barr) est appelé lyonisation, du nom de Mary F. Lyon, qui a publié pour la première fois cette hypothèse en 19618. Selon la théorie de Lyon (1962), l’inactivation d’un chromosome X dans toutes les cellules somatiques femelles est le résultat d’un mécanisme de compensation de dosage des gènes liés au chromosome X dont la dose diffère entre le mâle et la femelle. Le chromosome X inactivé est maintenu au cours de la division cellulaire : une cellule inactivant le chromosome X paternel puis se divisant donnera 2 cellules dans lesquelles le chromosome X paternel sera inactivé. Ainsi, toute la descendance d’une cellule portera le même chromosome X inactivé. On parle alors de mosaïsme. 

 Le test chromatinien de BARR 

Le prélèvement La recherche du corpuscule de BARR est pratiquée essentiellement par frottis de la muqueuse buccale, mais peut également se faire sur la muqueuse vaginale, les cellules urinaires, les cellules des crachats, les cellules amniotiques ; on peut aussi le rechercher au niveau des biopsies. Elle permet de définir le sexe chromatinien. C’est un examen rapide, dont le résultat peut être obtenu au bout de quelques minutes. D’une manière générale, la présence d’un corpuscule de BARR dans les cellules signe la présence de deux chromosomes X qui dans le cas normal renvoie au sexe femelle, ce qui a conduit à utiliser ce test comme test de féminité pour les épreuves sportives. 

La technique 

Aussitôt que le prélèvement est fait, on fixe la lame à la laque et on laisse sécher. Pour mettre en évidence la chromatine de BARR, on procède à une cytoplasmolyse (destruction des cellules pour libérer les noyaux) à l’HCL.N. à 56°c de cellules épithéliales de la muqueuse jugale, on procède à plusieurs séries de déshydratation/hydratation à l’alcool et à l’eau distillée et on fait une coloration de GUARD (bleu de Toluidine) puis on examine entre lame et lamelle, à l’immersion deux cents (200) noyaux inter-phasiques. Cela nous permet de déterminer le pourcentage de noyaux présentant un corpuscule de BARR et le corréler avec le sexe chromatinien. Il peut arriver que ces corpuscules soient atypiques en taille ou en forme. 

Les résultats 

La chromatine sexuelle apparaît sous la forme d’un corpuscule bleu foncé (en GUARD) localisé près de la membrane nucléaire. Figure 1 : aspect du corpuscule de BARR à l’immunofluorescence (source : BMC biology 2004,2 :21) Le nombre de corpuscules de BARR observés dans une cellule est égal au nombre de chromosome X moins un, le chromosome X actif. La présence d’un corpuscule de BARR dans plus de 15% des cellules étudiées, traduit la présence de deux chromosomes X dont 1 inactif, donc un sexe chromatinien féminin et pouvant correspondre à une formule chromosomique 46, XX ou 46,XXY. De même, l’absence de corpuscule ou sa présence dans moins de 5% des cellules, traduit la présence d’un seul chromosome X donc un sexe chromatinien masculin, pouvant correspondre entre autres possibilités aux formules chromosomiques 46,XY ou 45,X0 ou 47,XYY. Corpuscule de Barr 5 Des taux intermédiaires, entre 5% et 10%, feront évoquer une mosaïque 45,X0/46,XX ou 46,XX/46,XY etc. Ainsi, le corpuscule de BARR est présent:  Chez La femme normale (46,XX)  Dans le syndrome de KLINEFELTER (47, XXY) ou une de ses variantes (48, XXYY)  Chez les femmes triple X (47, XXX) : 2 corpuscules de BARR  Chez les femmes 4 X (48, XXXX) : 3CB Il est absent :  Chez l’homme normal  Dans le syndrome de Turner (45, X0)  Dans le syndrome de Morris (testicules féminisants) Par ailleurs, il peut arriver qu’on examine des corpuscules BARR atypiques par leur taille ou leur forme. 

 Facteurs influençant les résultats de CB 

Le degré de polyploïdie : nombre de CB= nombre de X – degré de polyploïdie/ 2  L’état physiologique Chez les femmes souffrant de réaction allergique ou d’intoxication chimique il y’a une diminution de la fréquence de la chromatine de BARR. 6  L’âge  au stade préimplantatoire : il n’y a pas d’inactivation donc pas de CB observée  au delà de 70 ans (5 à 10 % seulement) : il y a diminution de la fréquence de la chromatine de BARR au fur et à mesure que le sujet prend de l’âge (phénomène de réactivation ou désinactivation).  Substances diminuant la CB:  Chez les malades sous ACTH (Hormone Adréno-Corticotrophine Hypophysaire)  Chez les malades sous corticothérapie  Certaines substances bactéricides tels le chloramphénicol et le Benzyle pénicilline diminuent la taille de la CB.  Nature tissulaire Diminution de la CB dans les tissus à grande activité mitotique: le tissu germinal, le tissu néoplasique.  Le pourcentage Dans les cas de mosaïques, il y a réduction de la CB par dilution (Ex: 46,XX/45,X0) Dans les cancers on assiste à une diminution de la fréquence et de la taille de la CB ; si le cancéreux va mieux, il y a augmentation de la taille et de la fréquence de la CB. 

Indications Le test chromatinien de BARR est utilisé afin de déterminer le sexe de l’individu et par conséquent détecter certaines anomalies du développement sexuel.