Détermination des concentrations minimale inhibitrices(CMI)

Evaluation de la croissance mycélienne

L’activité antifongique est révélée par l’absence ou la présence de la croissance mycélienne. Le test de l’analyse de Variance (tableau 03Annexe 02) montré que l’effet de concentration a une différence très hautement significatif (P≤0.001)sur la croissance mycélienne du Fusarium sporotrichioides . Les résultats de diamètre de l’activité antifongique d’huile essentielle de Laurus nobilis L sont présentés dans le tableau no 04. Elles varient entre 0 et 85 mm (y compris le diamètre de disque). Avec les différentes concentrations d’huile essentielle extraite, on observe que la croissance mycélienne est remarquable après 72 h pour le témoin et la concentration 0.05% et il est démarre après les 96 heures pour la concentration de 0.25%, au-delà de cette concentration on n’observe aucune croissance. En montrant qu’il y a une augmentation de la croissance mycélienne avec le temps d’incubation a l’exception de la concentration 0.5% qu’il ne présent aucun croissance mycélienne. L’analyse statistique montre que le témoin présent une différence de croissance mycélienne du le 72 h à 144 h. D’après la figure 08 on peut noter qu’il ya un changement morphologique de la couleur des mycéliums qu’il est variée de jaune, blanc, rouge. Par comparaison au témoin (0% huile essentielle) qu’il présent un couleur de base des colonies de couleur jaune ayant micelles gonflées et un aspect poudreux, comme du coton, tourné du rouge après 96 h. A la fin de cette période, la taille de la colonie atteint 85mm, dans la concentration 0.05% la couleur de base des colonies de couleur blanc tourné du rouge après 96 heure, la concentration 0.25% présente seulement un couleur de base des colonies de couleur blanc, tandis que dans la concentration 0.5% où on a aucun croissance mycélienne mais la couleur de disque lui même est transformer en jaune.

Discussion Généralement, les huiles essentielles sont médiocrement solubles dans l’eau, ce qui pose beaucoup de problèmes pour étudier leur activité antibactérienne, ceci a été déjà rapporté par SOUTHWELL et al. (1993). La méthode de diffusion des disques nous a permis de mettre en évidence le pouvoir antibactérien d’huile essentielle du Laurus nobilis L vis-à-vis des bactéries testées. Les résultat indiquent que l’huile essentielle du Laurus nobilis L représente un certain degré d’activité contre les souches testées ce la est confirmé par les travaux de ZIMMERMANN (1998). Selon la classification de PONCE et al. (2003), Enterococcus feacalis ATCC 29212 et Escherichia coli ATCC 25922 présentant une sensibilité non négligeable à l’huile essentielle du Laurus nobilis L. L’huile essentielle du Laurus nobilis L n’a pas montré une activité antibactérienne intéressante cette résultat est comparable a celle de travaux de YAKHLEF, 2010 sur l’extrait de feuille du Laurus nobilis L, il trouve que les extraits du Laurus nobilis possèdent une capacité antimicrobienne mais faible en comparaison avec les extraits du Thymus vulgaris.

Cette faible efficacité est semble due probablement à les pertes des composés volatils d’huile essentielle durant l’extraction. Donc, il serait rentable d’essayer un autre procédé d’extraction pour obtenir d’huile essentielle efficaces du point de vue activité antibactérienne. Cette faible efficacité pourrait être aussi due au fait qu’au cours de la période d’incubation quelques composants volatils de l’huile peuvent s’évaporer des milieux de culture, ce qui diminuerait sa concentration, et par la suite son activité antibactérienne. Les données indiquent que les deux souches Enterococcus feacalis ATCC 29212 et Escherichia coli ATCC 25922 étant les souches les plus sensible au huile essentielle du Laurus nobilis avec un diamètre de 10.2 et 9.2 mm respectivement par contre les autres souches Enterobacter cloaceai ATCC 13047, Proteus mirabilis ATCC 49452 (7.9mm) et Klebseilla pneumonie ATCC 700603, qu’ils présentant un résistance de cet huile essentielle avec des diamètres de 7.7, 7.9, et 7.3 mm respectivement la dernière diamètre est proche de celui obtenu par DERWICH E et al(2009). L’huile essentielle du thymus fontanesii à une activité inhibitrice de 33 mm sur la bactérie Enterococcus feacalis ATCC 29212 (MEBARKI, 2010) par contre a notre huile qu’il présent une activité inhibitrice de 9.2 mm sur la même souche. Escherichia coli par leurs diamètre de sensibilité (10 mm) de notre huile essentielle est proche que les travaux de HADDOUCHI et al., (2008) avec un diamètre de 8 à 9 mm et qu’il est trouvé que cette huile à une activité faible par apport l’huile essentielle de Thymus fontanesii avec un diamètre de 20 mm.

D’après l’essai de MOHAMMEDI (2006) l’activé d’ huile essentielle des plantes testées la bactérie, Klebseilla pneumonie ATCC 700603 présent une sensibilité diffèrent sur ces huiles qu’il est plus haut que notre huile essentielle (7.3 mm) concernant les deux espèces Thymus fontanesii (88mm) et Cistus ladaniferus (33 mm) par contre l’huile essentielle du Smyrium alusatrum qu’il a aucun effet sur cette germe. A partir de ces comparaison on peut dire que l’huile essentielle du Laurus nobilis L à une faible activité antibactérienne contre ces souches testées, ainsi que nous prouvons constater que l’ activité antibactérienne dépend de la qualité d’ huile essentielle d’un part est dans un autre part de la souche bactérienne elle-même. Plusieurs études testant l’activité inhibitrice d’ huile essentielle confirment ce résultat telle que KALEMBA et KUNICKA (2003), qu’ils sont constaté que la sensibilité d’un microorganisme à l’huile essentielle dépend des propriétés de l’huile essentielle et le microorganisme elle-même. Il est bien connu que les bactéries à Gram positif sont plus sensibles à l’huile essentielle que les bactéries à Gram négatif (POOL., 2001).

A l’inverse, CELIKEL et KAVAS (2008) ont souligné, que l’action d’ huile essentielle volatiles a peu d’influence sur l’inhibition de la croissance de bactéries à Gram négatif peu d’influence sur l’inhibition de la croissance de bactéries à Gram positif ce pendant, quelque huile essentielle semblent être spécifiques, et exercent une importante activité inhibitrice contre les bactéries à Gram positif que sur les bactéries à Gram négatif. D’après ces deux pointes du vue notre résultats est comparable avec la première lorsque en comparait la souche Enterococcus feacalis ATCC 29212 a Gram positif (10.2 mm) avec les autres souches Gram négatif (Escherichia coli ATCC 25922 (9.2), Enterobacter cloaceai ATCC 13047 (7.7mm), Proteus mirabilis ATCC (7.9 mm) 49452, Klebseilla pneumonie ATCC 700603(7.3 mm). Selon (BURT. ,2004) la grande résistance des bactéries Gram négatif à l’huile essentielle liée en parte à la complexité de l’enveloppe cellulaire de ces microorganismes qui contient un double membrane, contrairement à la structure membranaire simple des bactéries Gram positif.

Conclusion

Un grand nombre des plantes aromatiques contiennent des composés chimiques ayant des propriétés antimicrobiennes. Plusieurs travaux de recherche ont été focalisés sur les huiles essentielles extraites de ces plantes aromatiques. L’utilisation des formulations volatiles à base des plantes aromatiques et médicinales peut présenter des nombreux avantages par rapport aux produits de synthèses actuels. L’extraction des huiles essentielles du Laurus nobilis L, a été réalisée par plusieurs méthodes. Cependant dans le présent travail une seule méthode est préconisée: hydrodistillation. L’huile essentielle extraite de cette plante possède des propriétés organoleptiques très appréciées en parfumerie et sera très convoitée en aromathérapie. La méthode de l’aromatogramme nous a permis de mettre en évidence le pouvoir antibactérien d’huile essentielle du Laurus nobilis L vis-à-vis de cinq bactéries, ce pouvoir est relativement faible, avec des zones d’inhibition variant entre 7.3 et 10.2 mm.

L’activité antibactérienne d’huile essentielle du Laurus nobilis L, évaluée par la méthode de diffusion, a permis de révéler une activité moyenne sur la croissance de Enterococcus feacalis ATCC 29212 et E. coli ATCC 25922 avec un diamètre d’inhibition de 10.2 et 9.2 mm respectivement , alors que Enterobacter cloaceai ATCC 13047, Proteus microsilis ATCC 49452 et Klebseilla pneumoni ATCC 700603 présentant résistant avec un diamètre d’inhibition de 7.7,7.9 et 7.3 mm respectivement. La méthode de contact direct nous a permis de mettre en évidence le pouvoir antifongique d’huile essentielle du Laurus nobilis L vis-à-vis de la souche Fusarium sporotrichioides. L’activité antifongique d’huile essentielle du laurus nobilis L s’est avéré un agent antifongique efficace contre le Fusarium sporotrichioides à une dose de 0.5% d’huile essentielle de Laurus nobilis L qu’il correspond le CMI avec un indice d’inhibition de 100%. L’activité antifongique croit au fur et à mesure qu’augmente la concentration en huile essentielle ce la est l’induit à la régression de vitesse de la croissance mycélienne qu’ils sont appariât sous microscope avec des déchirures, des petits diamètres, nombres et avec des couleurs différents. Nos résultats indiquent que l’huile essentielle du Laurus nobilis L n’a pas une activité antibactérienne intéressante en revanche, elle a montré des bonnes activités antifongiques et aussi une activité important sur les bactéries à Gram positif que les bactéries a Gram négatif.