Détermination de la structure du composé TST139-26-1

Détermination de la structure du composé TST139-26-1

Le produit TST139-26-1 a été obtenu sous forme de cristaux blancs. Le composé a été analysé en SM et RMN pour la détermination de sa structure. Spectres de masse ESI-MS Sur chaque spectre de masse (Figure 63) ESI-MS enregistré on observe un pic à m/z = 255 en mode négative, correspondant à l’ion pseudo moléculaire [M-H]- et un pic à m/z = 279 en mode positive, correspondant à l’ion pseudo moléculaire [M+Na]+, soit une masse moléculaire de M = 256, relative à la formule brute C15H12O4.Les pics multiples à 7.47 à 7.38 ppm (5H, m) correspondent aux signaux des protons aromatiques. La présence du système ABX (5.43 ppm, dd, J = 13.0 et 3.1 Hz ; 2.83 ppm, dd, J = 17.2 et 3.1 Hz et 3.09 ppm, dd, J = 17.2 et 13.0Hz) pour les protons en H-2 et H-3 (encadré en en bleu sur le spectre RMN 1H) correspondent aux signaux des protons du squelette flavonoïdique de type flavanone du produit TST139-26-1 (Figure 64).

Spectre du carbone RMN 13C (CDCl3, 100MHz)

On observe la présence de 15 carbones dont un carbonyle à 195.9 ppm. Deux carbones respectivement à 163.3 et 164.6 ppm sont des carbones liés chacun à un hétéroatome, ils seront en position méta l’un de l’autre, eux-mêmes en position méta d’un carbone lié à un hétéroatome, ce qui indique que le noyau A est disubstitué en position 5 et 7. Les carbones à 126.3, 129.0, 129.1 et 138.4 ppm confirment la présence d’un cycle benzénique (Figure 65). De plus, ceci complète les informations en RMN 1H que le produit TST139-26-1 est un flavonoïde de type flavanone.Les couplages hétéronucléaires 1J proton-carbone observés par expérience HSQC (Figure 66) permettent d’attribuer les protons aux carbones qui les portent. Les protons aromatiques à 7.47 à 7.38 ppm (5H, m) (encadré en bleu) sont portés par les carbones aromatiques à 126.3 ppm (C-2’, C-6’), 129.1 ppm (C-3’, C-5’) et 129.0 ppm (C-4’). Le singuliet à 6.00 ppm correspond à deux protons portés par les carbones à 95.6 ppm (C-8) et 96.9 ppm (C-6). Le proton à 5.45 ppm est rattaché au carbone à 79.4 ppm (C-2) et les doublets dédoublets à 2.85 ppm (1H) et 3.12 ppm (1H) sont portés par le carbone à 43.2 ppm (C-3) (Tableau 11). De plus ces informations permettent de déterminer la présence de 6 carbones quaternaires, 8 CH et un CH2 attribuable à la formule brute C15H12O4 de masse moléculaire M = 256. La réalisation d’expériences RMN dans le CDCl3 permet d’observer le proton chélaté OH-5 (12.07 ppm).

En comparant avec les données disponibles dans la littérature [Diaz-Napal et Palacios 2013, Allard et al., 2011., Ching et al., 2007], il nous est possible d’identifier que les composés TST139-26-1 et TST139-26-2 ont la même structure que le pinocembrine (Figure 70). Le pinocembrine a été isolé dans d’autres espèces de Cryptocarya : C. strictifolia [Juliawaty et al., 2000], C. chartacea [Allard et al., 2011], C. chingii [Feng et al., 2012] et aussi retrouvé dans d’autres plantes, Dalbegia odorifera [Lee et al. 2013] et Flourensia oolepsis [Diaz-Napal et Palacios, 2013].RMN 1H (CDCl3, 400 MHz) : δ ppm 12.04 (1H, s, 5-0H), 7.47-7.38 (5H, m, H-2’, H-3’, H-4’, H-5’, H-6’) ; 6.00 (2H, brs, H-6, H-8) ; 5.43 (1H, dd, 3J2-3b = 13 Hz, 3J2-3a = 3.1 Hz , H-2) ; 3.09 (1H, dd, 2J3a-3b = 17.2 Hz, 3J3a-2 = 3.1 Hz, H-3a ) ; 2.83 (1H, dd, 2J3b-3a = 17.2 Hz, 3J3b- 2 = 13 Hz, H-3b) RMN 13C (CDCl3, 100 MHz) : δ ppm 195.9 (C-4), 164.6 (C-7), 164.5 (C-9), 163.3 (C-5), 138.4 (C-2’), 129.1 (C-3’, C-5’), 129.0 (C-4’), 126.3 (C-2’, C-6’), 103.4 (C-10), 96.9 (C-6), 95.6 (C-8), 79.4 (C-2), 43.4 (C-3).

Etude phytochimique de la fraction AcOEt de Cryptocarya rigidifolia (MG442-2)

Suite aux résultats des tests biologiques, la fraction AcOEt, MG442-2, a été choisie pour effectuer une étude phytochimique approfondie (revoir page 57). Fractionnement et isolement Un premier fractionnement de la fraction MG442-2 sur chromatographie d’exclusion sur gel de Sephadex LH-20 (éluant : mélange H2O/MeOH, 50/50) a donné cinq fractions (MG442-21 à MG442-25).Après un fractionnement de la fraction MG442-22 sur colonne C18 à moyenne pression (élution isocratique H2O/ MeOH, 80/20), 9 fractions (MG442-22-1 à MG442-22-9) ont été obtenues. L’analyse de la fraction MG442-22-1 par CCM préparative (éluant : Hexane/AcOEt, 50/50), permet d’isoler 2 produits MG442-221-1 et MG442-221-3. La fraction MG442-22-9 après fractionnement par chromatographie d’adsorption sur silice 60, (élution isocratique Hexane/AcOEt, 60/40) a fourni les produits MG442-229-3 et MG442- 229-7 (Diagramme 8).d’une colonne C-18 puis la purification par CCM préparative de MG442-22-1 a donnée le produit MG442-221-1 sous forme d’huile de couleur pâle (11,8 mg). Spectre de masse ESI-MS Le spectre de masse, sorti par ESI-MS en mode positive expose un pic à m/z = 393, correspondant à l’ion pseudo moléculaire [M+Na]+, attribuable à une masse moléculaire de M = 370.