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CONTRIBUTION À LA CONNAISSANCE DE NEMATODES PARASITES DES MULETS
Recherche et étude morphologique des Nématodes
Recherche des nématodes Les différents organes (œsophage, estomac, caeca, intestin et leurs contenus, cavité générale, rein, foie, gonades) ont été examinés à la loupe binoculaire. Chaque organe a été ouvert et munitieusement observé à la loupe. Des photos in situ d’organes parasités y ont également été réalisées Les nématodes trouvés ont été mis dans des salières contenant de l’eau. Avec une plume ou des pinceaux, les adultes ont été nettoyés, les stades larvaires ont été enlevés de la capsule où ils étaient logés puis nettoyés. Tous les nématodes, adultes et larvaires, ont été conservés dans des tubes étiquetés contenant de l’éthanol 70°c. Sur chaque étiquette, le nom de l’hôte, la date, le lieu de récolte et l’organe dans lequel le parasite a été trouvé sont marqués. Le nombre de parasites par organe pour chaque espèce et leur site ont été mentionnés dans un cahier.
Etude morphologique des Nématodes
Les vers, montés entre lames et lamelles dans une goutte de lactophénol qui permet leur éclaircissement, sont observés au microscope photonique de type Nikon et les dessins ont été réalisés à la chambre claire. II.5.3. Etude histologique Des prélèvements ont été effectués sur les différents organes parasités en vue d’une étude histologique. Le matériel a été inclus dans de la paraffine, coupé et coloré suivant les procédés classiques après fixation : 1er bain d’alcool à 95° de 8 h à 12 h ; 2ème bain d’alcool à 95° de 12 h à 15 h ; 3ème bain d’alcool à 95° à partir de 15 h. La préparation y a été maintenue jusqu’au lendemain à 8 h ; 1er bain de butanol de 8 h à 12 h ; 19 2ème bain de butanol de 12 h à 15 h ; 3ème bain de butanol de 15 h à 18 h. Le matériel a été maintenu dans de la butyparaffine jusqu’au lendemain à 8 h. 1er bain de paraffine de 8 h à 12 h ; 2ème bain de paraffine de 12 h à 15 h ; 3ème bain de paraffine de 15 h à 18 h. La mise en bloc s’est faite immédiatement après le 3ème bain de paraffine dans des «barres de Leuckart» posées sur une plaque de verre. La paraffine, neuve et préalablement filtrée, est d’abord versée dans le moule. Après formation d’une fine pellicule de paraffine au contact du moule, le matériel est mis à son tour dans le moule et orienté. Pour une meilleure adhésion du matériel au milieu d’inclusion, la paraffine qui l’entoure a été réchauffée. Les blocs sont ensuite étiquetés puis refroidis. Des coupes de 5 à 7 µm d’épaisseur sont réalisées deux à trois jours après la mise en bloc, au moyen d’un microtome à paraffine de type Minot. Elles ont ensuite été étalées et collées à l’albumine sur des lames nettoyées à l’alcool à 95°. Le séchage s’est fait à l’étuve à paraffine à 60°C. Les lames préalablement chauffées ont été colorées suivant la technique du Trichrome de Masson : • déparaffinage, hydratation et coloration : 1er bain de toluène pendant cinq minutes ; 2ème bain de toluène pendant cinq minutes ; 1er bain de butanol pendant cinq minutes ; 2ème bain de butanol pendant cinq minutes ; un bain d’alcool à 95° pendant cinq minutes ; un bain d’alcool à 70° pendant cinq minutes ; lavage à l’eau courante pendant cinq minutes ; coloration à l’hématoxyline de Groat pendant deux à cinq minutes ; lavage à l’eau distillée pendant cinq minutes ; coloration à la Fushine-acide-ponceau pendant cinq minutes ; lavage à l’eau acétique ; coloration à l’orangé G molybdique pendant cinq minutes ; lavage à l’eau acétique ; coloration au vert lumière acétique ; lavage à l’eau acétique. • déshydratation et montage un bain d’alcool à 70° pendant cinq minutes ; un bain d’alcool à 95° pendant cinq minutes ; 1er bain de butanol pendant cinq minutes ; 2ème bain de butanol pendant cinq minutes ; 1er bain de toluène pendant cinq minutes ; 2ème bain de toluène pendant cinq minutes. 20 Le montage des lames a été fait au baume de Canada aussitôt après leur sortie du deuxième bain de toluène. Elles ont ensuite été séchées à plat dans l’étuve à 60°C.
Logiciels de traitement et d’analyse de données utilisés
Nous avons utilisé les logiciels Word 2000 pour la saisie des données et Excel 2000 pour le calcul de moyennes et d’écarts types. Ces derniers nous ont également permis de tracer les graphiques présentés. C’est avec le programme SPSS 11.5 Production Facility que nous avons effectué les analyses statistiques (test ANOVA).
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