Activités antiplasmodiale et antioxydante des extraits de Helichrysum gymnocephalum (DC.) Humbert,

Activités antiplasmodiale et antioxydante des extraits de Helichrysum
gymnocephalum (DC.) Humbert,

Rendement de l’extraction 120 g de poudre de plante (feuilles et tiges) ont donné 17,01 g d’extrait éthanolique soit un rendement de 14,2 %. Le fractionnement liquide-liquide de 5,69g d’extrait éthanolique a donné 0,78g d’extrait hexanique. 1,38 g d’extrait dichlorométhane (rendement = 24,3 %), indiquant une proportion significative de pigments apparentés à la chlorophylle, et 3,39gd’extrait aqueux (rendement = 59,6 %). 

Criblage phytochimique

Les résultats obtenus lors du screening phytochimique de H.gymnocephalum sont donnés dans le Tableau 1. Tableau 1 : Résultats du criblage phytochimique des parties aériennes de H. gymnocephalum Familles chimiques Réactifs de caractérisation Résultats Composés phénoliques Coumarines NaOH, lampe U.V. de λ 254 nm et 366 nm + Flavones HCl, Mg – Flavonols HCl, Mg, Alcool isoamylique +++ Flavanones, flavanonols HCl, Mg – Anthocyanes HCl, NH4OH – Leucoanthocyanes HCl à chaud – Anthraquinones libres Eau, Benzène, NH4OH – Hétérosides anthracéniques HCl, CHCl3 , NH4OH – Tanins NaCl, Gélatine ++ + Tanins condensés FeCl3 +++ Tanins hydrolysables FeCl3 – Familles chimiques Réactifs de caractérisation Résultats Composés phénoliques (suite) Polyphénols Gélatine 1 %, H2O NaCl ++ Phénols, flavanes Vanilline chlorhydrique + Terpénoïdes Stérols insaturés H2SO4 +++ Stéroïdes lactoniques Acide picrique, NaOH, Acide 3,5-dinitrobenzoïque, KOH +++ +++ Stéroïdes Anhydride acétique, H2SO4 +++ Iridoïdes HCl, Ethanol, Glycérol, CuSO4 – Saponines Hauteur mousse – Cardénolides H3PO4 , Acide trichloracétique, lampe U.V. ++ Hétérosides désoxy-2-sucres FeCl3 , Acide acétique – Autres Alcaloïdes KI, I2 , HgCl2 , Bi(NO3 )3 , – : test négatif : aucune réaction observée ; + : faible coloration ou formation de peu de précipité ; ++ : Coloration franche ou précipité abondante ou mousse abondante ; +++ : Coloration intense ou floculation immédiate ou hauteur de mousse supérieure à 5 cm. Ainsi, les métabolites secondaires détectés dans Helichrysum gymnocephalum comprennent :  des composés phénoliques et dérivés, qui sont surtout représentés par des flavonoïdes dont les flavonols, des coumarineset des tanins condensés ;  des terpénoïdes dont les stéroïdes et les stérols insaturés.

Fractionnement et isolement

Le fractionnement de 1g d’extrait dichlorométhane de H. gymnocephalum sur colonne ouverte de gelde silice avec un gradient de CHCl3/EtOAc [98:2 à 93:7], puis 100% EtOAc a permis d’obtenir 5fractions numérotées DCL11 à DCL15. La fraction DCL12 (967,2 mg) a subi un deuxième fractionnement sur colonne ouverte de gel de silice avec un gradient de CHCl3/ EtOAc de 99: 1 à 100% EtOAc pour donner 5 autres sous fractions notées DCL121à DCL 125. le produit DCL124b (21 mg) a été obtenu par chromatographie sur couche mince préparative de la fraction DCL 124 (56 mg), utilisant l’éluant CHCl3 / MeOH [95: 5]. 3-4. Activités biologiques 3-4-1 Activité antiplasmodiale L’extrait dichlorométhane présente une activitéantiplasmodialein vitro avec une IC50 égale à 29,67 µg/ mL et la cardamomin IC50= 43 µM contre Plasmodium falciparum, souche résistante à la chloroquine. Le produit de référence quinine a une IC50= 0,0037 µM. 3-4-2 Activité antioxydante Tableau 2 : Activité antioxydante des extraits de H. gymnocephalum et du composé isolé DCL124b testés à 1mg / mL Produit % d’inhibition de DPPH Equivalent α-Tocophérol (µM / mg/ mL d’extrait) extrait brut éthanolique 95,21 556,63 extrait dichlorométhane 89,78 477,46 DCL124b (cardamomin) 52,89 59,16 Le Tableau 2 indique que l’extrait brut éthanolique à 1 mg / mL, qui est équivalent en α-Tocophérol à 553 µM / mg / mL d’extrait a réduit le DPPH à 95,21 % est doté d’une activité antioxydante très élevée. Le produit isolé cardamominseul,à 1 mg/ mLéquivalent à 59,16 µM / mg/ mLde α-Tocophérol réduit le DPPH à 52,89 %. Cette forte activité de l’extrait brut peut être due aux composés phénoliques présents dans l’extrait brut éthanolique et confirmés lors du criblage phytochimique de H. gymnocephalum (Tableau 1). [20], ont suggéré que les composés polyphénoliques ont des effets inhibiteurs sur la mutagenèse et la cancérogenèse (des maladies dues aux radicaux libres) chez l’homme. Afrique SCIENCE 12(6) (2016) 223 – 232 229 Lalasoa R. RANARIVELO et al. 3-5. Détermination structurale du produit isolé DCL 124b Le produit isolé a été soumis aux analyses RMN 1D et 2D dans MeOD et dans DMSO (1H, COSY, HSQCed, HMBC, RMN 13C), et en spectrométrie de masse. Son spectre RMN 1H montre des signaux à 6.02ppm et 5.95 ppm avec J = 2.1 Hz qui sont caractéristiques des protons H-6 et H-8 d’un flavonoïde. On remarque les signaux à 7.94 ppm et 7.71 ppm avec J = 15.6 Hz caractéristiques de deux protons éthyléniques voisins (confirméspar leurs corrélations COSY). Ces protons éthyléniques sont enchaînés avec un C = O (à 192,3 ppm) d’après le spectre HMBC. Les multiplets entre 7,4 ppm et 7,7 ppm correspondent aux protons d’un cycle aromatique. La position du méthoxyle est obtenue grâce à la corrélation HMBC du CH3 avec le carbone à 163,4 ppm (C-9). L’ensemble de ces données permet d’écrire la structure de la chalcone suivante : [1 – (2,4-dihydroxy-6- methoxyphenyl)-3-phenylprop-2-en-1-one]. Il s’agit d’une chalcone connue appelée aussi cardamomin. 3-5-1. Relevés spectraux du produit isolé cardamomin ESI+ / MS : m / z 293 [M + Na] +, M = 270 g / mol, C16H14O4 ; 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.94 (d, J = 15.6 Hz, 1H, H-2), 7.71 (d, J = 15.7 Hz, 1H, H-3), 7.68 -7.63 (m, 2H, H-1’ et H-5’), 7.43 (m, 3H, H-2’, H-3’ et H-4’), 6.02 (d, J = 2.1 Hz, 1H, H-8), 5.95 (d, J = 2.2 Hz, 1H, H-6), 3.95 (s, 3H, O-CH3).1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 7.84 (d, J = 15.7 Hz, 1H, H-2), 7.71 (dd, J = 7.5, 1.7 Hz, 2H, H-1’ et H-5’), 7.65 (d, J = 15.7 Hz, 1H, H-3), 7.51 – 7.39 (m, 3H, H-2’, H-3’ et H-4’), 6.01 (d, J = 1.9 Hz, 1H, H-8), 5.91 (d, J = 2.1 Hz, 1H, H-6), 3.87 (s, 3H, O-CH3). 13C NMR (75 MHz, MeOD) δ ppm 192.3 (C-4), 163.4 (C-9), 141.3 (C-3), 135.6 (C-1), 129.7 (C-1’, C-5’), 128.6 (C-2’, C-4’), 127.9 (C-3’), 127.5 (C-2), 95.8 (C-6), 91.30 (C-8), 54.9 (O-CH3). 3-6. Discussion L’activité antiplasmodiale est vérifiée scientifiquement dans cette plante car l’extrait de dichlorométhane (IC50=29,67 µg/ mL), la cardamominisoléé (IC50= 43 µM)présentent des activitésantiplasmodialesin vitro contre Plasmodium falciparum FCM29, souche résistante à la chloroquine. Le produit de référence quinine a une IC50= 0,0037 µM. Les composés phénoliques dont les flavonoïdes sont couramment rencontrés chez les plantes du genre Helichrysum. H. arenarium contient par exemple plus d’une dizaine de sériesde flavonoïdes [21, 22]. H. pamphylicum contient des flavonoïdes à potentialité anticancéreuse [23]. Ainsi, à part le fait que ce genre végétal soit connu pour les huiles essentielles [15, 24], les flavonoïdes peuvent aussiêtre considérés comme leurs marqueurs chimiotaxonomiques.Ce travail est le premier rapport sur l’isolement de la chalcone cardamomin dans H. gymnocephalum. Elle a été isolée pour la première fois dans les graines de Amomum subulatum par [25]. Cardamomin a été isolée et représente le constituant majeur dans des plantes de la famille Zingiberaceae, notamment du genre Alpinia [26, 27], mais aussi dans Boesenbergia [28, 29] et Syzygium samarangense (Bloom) de la famille des Myrtaceae [30]. L’activité antioxydante que nous avons détectée de H. gymnocephalum peut être reliée avec sa richesse en composés phénoliques, dont les flavonoïdes. En effet, plusieurs recherches ont montré que ce genre végétal est connu pour cette activité biologique [31, 32]. L’étude de l’activité antioxydante que nous avons effectuéea montré que l’activité de la cardamominreprésente plus de la moitié de l’activité de l’extrait brut. Ce résultat est conforme aux données de la littérature sur cette molécule, en effet, elle est connue pour ses propriétés antioxydantes et anticancéreuses [27, 31-33].