METABOLITES SECONDAIRES ISSUS de Turraea sp

METABOLITES SECONDAIRES ISSUS de Turraea sp

Cadrage

Le genre Turraea appartient à la famille Meliaceae et compte environ 85 espèces dans le monde. 71 Les 24 espèces de Turraea rencontrées à Madagascar sont toutes endémiques. Certaines plantes du genre Turraea sont très utilisées en médecine traditionnelle à Madagascar. La plus connue est T. sericea ou « Fanazava » qui entre dans la composition des « sotromangidy » ou infusions amères jouissant d’une grande réputation pour ses effets stimulant et aphrodisiaque. 72 Les fruits mûrs et les écorces amères de certaines espèces de Turraea sont employés en médecine traditionnelle malgache pour traiter les maux de gorge et la conjonctivite, et pour améliorer l’acuité visuelle. 73,74 De nombreuses études chimiques et biologiques ont été consacrées au genre Turraea du fait de sa richesse en limonoïdes, triterpénoïdes et prégnanes. Ces produits possèdent des activités cytotoxique, larvicide et anti-appétante pour les insectes. 75,76 Différentes parties d’une espèce non identifiée spécifiquement au niveau taxonomique Turraea sp. ont été récoltées près du village d’Antenina à l’Ouest du Parc National de Zahamena en 2002. Lors d’un criblage antiplasmodial effectué au CNARP, l’extrait éthanolique des feuilles s’est montré actif sur la souche chloroquino-résistante FCM29 de Plasmodium falciparum avec une valeur de CI50 égale à 3,9 µg/mL. De ce fait, son fractionnement bio-guidé a été entrepris afin d’isoler le (ou les) principe(s) actif(s) correspondant(s). 

Résultats et discussion

Isolement et identification structurale

La première étape du fractionnement de l’extrait éthanolique (3,5 g) consistait en un partage liquide-liquide avec des solvants non miscibles entre eux pour donner quatre fractions : hexanique (0,85 g), chloroformique (1,88 g), butanolique (0,13 g) et aqueux (0,31 g). Les fractions hexanique et chloroformique ont montré les meilleures activités antiplasmodiales avec des valeurs de CI50 égales à 1 et 1,2 µg/mL, respectivement. La fraction chloroformique dont le rendement est plus élevé (8,24 %) que la fraction hexanique (3,73 %) a été retenue pour la suite des travaux chimiques d’isolement. Les fractions A1-A9 résultant de la chromatographie sur colonne de silice de la fraction chloroformique étaient moins actives que cette dernière en présentant des valeurs de CI50 supérieures à 3 µg/mL (Schéma 5). Cette forte diminution de l’activité antiplasmodiale pourrait provenir, soit de la séparation des constituants actifs à l’issu du fractionnement, soit de la dégradation de certaines molécules actives au cours du fractionnement. Malgré de tels désagréments, la purification des fractions ayant montré une activité antiplasmodiale avec des valeurs de CI50 inférieures à 20 µg/mL a été poursuivie. Quatre produits 5.1 – 5.4 ont été ainsi isolés. 35 Schéma 5 : Protocole d’isolement des produits 5.1 – 5.4 issus de Turraea sp. Les structures chimiques des produits 5.1 – 5.4 sont représentées à la figure 8. Les produits 5.3 et 5.4 sont des triterpènes pentacycliques connus et identifiés respectivement à l’acide triptocallique B ou acide 3-hydroxymultiflor-7-én-29-oïque (type multiflorane) et l’acide ensculentoïque ou acide 3-oxo-taraxér-14-én-29-oïque (type taraxérane). Fraction chloroformique de l’extrait éthanolique (1,8 g) Activité antiplasmodiale (CI50=1,2 µg/mL) CC flash de silice (CHCl3/AcOEt/MeOH en gradient)  Figure 8 : Structures chimiques des produits 5.1-5.4 issus de Turraea sp. Les démarches suivies qui ont permis d’attribuer les structures chimiques 5.1 et 5.2 aux deux autres produits isolés sont résumées ci-après. Pour la clarté de l’exposé, nous supposons ces structures établies. Identification structurale du produit 5.1 Le spectre de masse ESI à haute résolution du produit 5.1 fournit un pic pseudomoléculaire [M+H]+ à m/z 455,3517, compatible avec la composition élémentaire C30H47O3 (calculé : 455,3525). 37 Sur son spectre RMN 1H, sont observés des signaux attribuables à sept groupements méthyles tertiaires à δ 0,93 (s, 3H, H-27), 0,98 (s, 6H, H-23 et H-25), 1,03 (s, 3H, H-26), 1,01 (s, 3H,H-28), 1,10 (s, 3H, H-24) et 1,23 (s, 3H, H-30), et un proton oléfinique à δ 5,47 (dd, J=6,4 et 3,2 Hz, H-7). La présence de signaux à δ 2,25 (dt, J=14,5 et 3,7 Hz, H-2a) et 2,73 (dt, J=14,5 et 5,5 Hz, H-2b) imputables à des protons d’un groupement méthylénique en α d’un carbonyle est également notée. L’interprétation des spectres RMN 13C et 13C DEPT-135 révèle l’existence de 30 pics de résonance engendrés par une fonction cétone à δ 217,2 (C-3), une fonction acide carboxylique à δ 184,5 (C-29), une double liaison trisubstituée à δ 117,3 (C-7) et 145,6 (C-8), dix méthylènes, trois méthines, six carbones d’hybridation sp3 et sept méthyles. Les spectres RMN 1H et 13C du produit 5.1 présentent de grandes analogies avec ceux de l’acide triptocallique B (5.3). En effet, l’étude comparative de leurs spectres RMN 1H et 13C montre que les déplacements chimiques des signaux dus aux groupements méthyles, méthylènes et méthines sont identiques pour les deux produits, sauf ceux provenant du cycle A. La présence du groupement carbonyle en C-3 et d’un groupement méthyle en C-10 ainsi que la position du méthine oléfinique en C-7 sont déduites des taches de corrélation observées sur le spectre HMBC entre H-1 et C-3, H-23 et H-24 et C-3, C-4 et C-5, H-25 et C-1, C-9 et C-5, H-7 et C-5, C-9 et C-14. Les corrélations HMBC entre H-26 et C-12, C-14 et C-18 d’une part, et entre H-30 et C-29, C-19 et C-21 d’autre part, suggèrent que la fonction acide carboxylique se trouve en position C-29 et que les carbones C-13 et C-20 sont méthylés. De la même manière, des corrélations HMBC indiquent que les carbones C-14 et C-17 sont substitués chacun par un groupement méthyle. Le mode de substitution du squelette pentacyclique par les sept groupements méthyles et la fonction carboxyle correspond à celui d’un triterpène pentacyclique de la série multiflorane.