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INVENTAIRE DES MOUSTIQUES AU NIVEAU DU LAC DES OISEAUX
Présentation de la famille des Culicidae Apparus
il ya plus de 170 millions d’années, les moustiques ou Culicidae appartiennent à la classe des Insectes de l’embranchement des Arthropodes. Caractérisés par une paire d’ailes, ces Diptères comptent plus de 3500 espèces réparties majoritairement au sein de 3 genres principaux Aedes, Anopheles et Culex (Resh & Cardé 2003). Grâce à leurs fortes capacités d’adaptation et de vol, ils sont aujourd’hui présents partout dans le monde. Les moustiques sont des Insectes holométaboles. Leur développement passe par une phase larvaire aquatique avant le stade adulte aérien nymphale (Clements 1992). Le cycle de développement des Culicidae se distingue par deux phases distinctes : – Un cycle pré imaginal qui se déroule en milieu aquatique et regroupe l’œuf, les quatre stades larvaires, et la nymphe. – Une phase aérienne qui concerne l’adulte ou imago ((Fig 4). Le stade Œuf: L’œuf comprend de l’intérieur vers l’extérieur ; l’embryon, la membrane vitelline pellucide, un endo-chorion épais et un exo-chorion plus ou moins pigmenté et ornementé, il est de 0,5 mm de taille (Rodhain et Perez, 1985). Au moment de la ponte il est blanchâtre et prend rapidement, par oxydation de certains composants chimiques de la thèque une couleur marron ou noire (Seguy, 1951). Les œufs d’Anopheles sont pondus isolement à la surface de l’eau. Leur forme est plus ou moins ovoïde et pourvue latéralement de flotteurs leur permettant de conserver une position horizontale. Les œufs d’Aedes sont allongés, rétrécis et montrent un réseau de fines dépressions. Ils flottent horizontalement à la surface de l’eau. Les œufs de Culex groupés en nacelle sont cylindro-coniques et se tiennent verticalement (Pressat, 1905 in Lounaci, 2003). Le stade larvaire : Les mues larvaires des Culicidae sont au nombre de quatre, les trois premiers stades présentent généralement des caractères chétotaxiques variables. Ce stade est aquatique. Les larves de Culicidae se différencient des autres insectes aquatiques par l’absence de pattes. Ces larves sont clairement constituées de trois parties une tête pourvue d’une paire d’antennes. Un thorax plus large que la tête. Un abdomen pourvu au niveau du huitième segment d’un siphon respiratoire. Méthodologie 12 Le stade nymphal : A la fin du quatrième stade de son développement, la larve cesse de se nourrir et devient nymphe où se fera la mise en place des organes de l’adulte. La durée est relativement courte et varie selon la température. La nymphe ne se nourrit plus et subit de profondes modifications anatomiques. Le stade adulte : Une fois la métamorphose accomplie, les moustiques mâles émergent en premier à la surface de l’eau suivis des femelles 24 à 48 h après (Rehimi, 2004). Les adultes se nourrissent des saccharides généralement trouvés dans les nectars végétaux. Après l’accouplement les femelles ont besoin pour le développement et la maturation de leurs œufs d’un apport important en protéines qu’elles l’obtiennent par l’intermédiaire d’un repas de sang sur un hôte vertébré. Les moustiques femelles n’ont besoin d’être fécondées qu’une fois dans leur vie. Après avoir pondu dans des gites larvaires, la femelle va partir à la recherche d’un nouveau repas de sang. C’est à l’occasion de ce repas sanguin que la transmission de l’agent pathogène se fait. Les femelles de certaines espèces peuvent toutefois pondre sans avoir pris de repas de sang, il s’agit alors d’une ponte autogène.
Modèle biologique
Le modèle biologique utilisé est un Culicidae prélevé dans le lac des Oiseaux (El tarf) lequel fera l’objet d’une étude systématique. L’espèce la plus abondante du lac servira de modèle durant notre étude. 2.2.3 Présentation de l’insecticide Le méthoxyfénozide (RH-2485), commercialisé sous le nom de Runner ou Intrepid, Dow Agro Sciences, USA est le nom commun du N-tert-butyl-N′-(3-methoxy-o-toluoyl)- 3,5-xylohydrazide. Sa formule empirique C22H28N2O3 et son poids moléculaire est 368,47g (Fig 5). Il appartient a la catégorie des insecticides du groupe des bisacylhydrazines qui sont des agonistes de la troisième génération de l’ecdysone. Le méthoxyfnozide (RH-2485) est un régulateur de croissance des insectes, agoniste de l’hormone de mue, 20- hydroxyecdysone (20 E), qui mime l’action de l’hormone de mue en se fixant aux récepteurs nucléaires spécifiques (EcRs) des ecdystéroides naturels (Wing et al., 1988 ; Carlson et al., 1994, Oberlander et al., 1995). Son effet a été observé in vivo sur le développement et la reproduction, il perturbe également la croissance des ovocytes et la production d’ecdystéroïdes, (Dhadialla et al., 2005 ).
Technique d’élevage
Les larves de Culiseta morsitans identifiées selon le logiciel: les Culicidae de l’Afrique méditerranéenne (Brhunes et al., 1999) proviennent du lac des Oiseaux. Cette espèce s’élève facilement. Elle est maintenue en conditions standardisées au laboratoire à une température de 25 ± 2°C et une humidité relative de 70 ± 5 %. Les larves sont élevées dans des récipients contenant de l’eau déchlorurée et sont nourries tout au long de leur développement avec de la nourriture pour poisson d’aquarium qui permet apport un protéique pour la vitellogénèse (ne pas sur-doser la nourriture, car un fort développement bactérien produira un bio-film à la surface pouvant asphyxier les larves). Une fois que les larves atteignent le stade nymphal, elles sont disposées dans des cages d’élevage jusqu’à l’émergence. Des dattes ou raisins secs suspendues dans la cage constituent la nourriture sucrée des adultes. Un repas sanguin est nécessaire pour les femelles accouplées. Les grandes cages sont privilégiées dans le cas d’élevages de masse. On optera pour les petites cages pour les essais toxicologiques. 2.3.2 Traitement et test de toxicité Une formulation du méthoxyfénozide 22,1 % de matière active à été fournie par le professeur Smagghe (Laboratoire d’Agro zoologie Université de Gent, Belgique). Des essais préliminaires basés sur une série de dilutions nous ont permis d’obtenir les concentrations finales suivantes: 0,012, 0,024, 0,036, 0,048, 0,072 mg/L. Dans ce travail nous avons testé les effets de l’exposition au méthoxyfénozide sur les larves nouvellement exuviées du quatrième stade de Culiseta morsitans. Les bioessais sont réalisés selon les méthodes standardisées, préconisés par l’organisation mondiale de la santé (OMS, 1983). Des lots de 25 larves sont répartis dans des gobelets contenant 200 ml d’eau déchlorurée. Trois répétitions sont préparées par concentration avec un lot témoin pour chaque répétition. Après 24h de traitement, les larves sont rincées et placées dans des nouveaux récipients contenant de l’eau déchlorurée et de la nourriture. Les taux de mortalité et de malformations sont enregistrées quotidiennement jusqu’à l’émergence des adultes. Les données de mortalité obtenues sont transformées en unité Probit. La linéarisation des données est faite selon une droite de régression Probit = f (log dose) (Finney, 1971). De cette Méthodologie 17 droite, on en déduit la CL50 et Cl90. La méthode de Swaroop (1957), précise l’intervalle de confiance avec une probabilité de 95% deux paramètres sont nécessaires : Le premier paramètre est le slope, noté par (S), est donné par la formule CL84 / CL50 + CL50/CL16 Le 2ème paramètre est la ƒ CL 50 est donnée par la formule : ƒ CL50 = S 2,77√N N : effectif total des individus morts entre 16 % et 84 % Log ƒ CL50 = log S 2,77/√N ƒ CL 50 = Anti-log 2, 77 ×S /√N Limite supérieure = ƒ CL 50× CL 50 Limite inférieure = ƒ CL50 / CL50 2.3.3 Détermination des différents types morphogénétiques Durant l’étude toxicologique, en plus des mortalités enregistrées après 24 heures de traitement, toute apparition anormale des individus est notée, jusqu’à l’émergence.
Dosage des métabolites
L’extraction des différents métabolites (lipides, glucides, protéines) à été réalisée selon le procédé de (Shibko et al., 1966). Les larves des séries témoins et traitées avec le méthoxyfénozide à la concentration létale (CL50) à différents âges (0, 2, 4, et 6 jours), ont été préalablement pesées, puis respectivement placées dans des tubes eppendorf auxquels nous avons ajouté 1ml d’acide trichloracétique (TCA) à 20%. L’essai est réalisé à raison de trois réplications avec 5 larves par tube eppendorf et un témoin pour chaque répétition. Après un broyage aux ultra-sons (Sonifier B-30) et centrifugation (5000 tours/mn pendant 10mn), le surnageant I est récupéré et servira au dosage des glucides. Au culot I, on ajoute 1ml d’un mélange éther/ chloroforme (V/V) et une deuxième centrifugation (5000 tours/mn pendant 10mn) permet de récupérer le surnageant II qui permettra le dosage des lipides ; le culot II sera ensuite repris dans 1ml d’eau distillée pour l’estimation des protéines totales.
1. INTRODUCTION GENERALE DISCUSSION . ANNEXE: Productions Scientifiques 
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