L’ÉTUDE CHIMIQUE D’UNE PLANTE CODÉE HYPOTENSIVE ENDÉMIQUE

L’ÉTUDE CHIMIQUE D’UNE PLANTE CODÉE HYPOTENSIVE ENDÉMIQUE

Préparation de l’extrait hydroalcoolique

100g de plantes sèches broyées tiges et feuille sont extraites avec d’alcool à 80% par chauffage à reflux dans un ballon de 2 l pendant une heure. Après filtration sur Büchner, la solution obtenue a été évaporée sous pression réduite donnant aussi l’extrait hydroalcoolique.

Screening phytochimique

Le but du screening phytochimique est de déterminer qualitativement les différentes familles chimiques présentes dans la plante étudiée. Pour cela, un extrait hydroalcoolique obtenu par chauffage à reflux dans l’éthanol à 80% a été préparé à partir de la drogue.

Les alcaloïdes

Ce terme, qui a été introduit par METSNER W. au début du XIVéme siècle, désigne des substances naturelles réagissant comme des bases. Ces composes de poids moléculaire plus ou moins élevé (exemple 100 à 200 daltons), ont un goût amer et sont caractérisés par la présence d’au moins un atome d’azote cyclique ou non. Exemple : Nicotine N N CH3 Figure 2 : Exemple des alcaloïdes

Macération chlorhydrique

Le résidu d’évaporation à sec est macéré dans 3 ml de HCl 2N puis le mélange est filtré sur papier filtre. Le filtrat est réparti dans 4 tubes à essai dont un a servi de témoin. Trois tests sont effectués : le test de MAYER, le test de WAGNER et le test de DRAGENDORFF. Les deux solutions sont mélangées volume à volume, puis le mélange est additionné de 10g d’acide tartrique et d’eau distillée (qsp 100 ml) Cinq gouttes de chaque réactif spécifique sont ajoutées dans le tube correspondant. La présence d’alcaloïdes dans l’extrait à analyser est révélée par l’apparition d’un précipité ou d’une floculation (DALTON, 1979 ; CORDELL, 1981 ; BRUNETON, 1993).

Test préliminaire

A partir de l’extrait hydroalcoolique précédemment préparé, nous en avons pris un volume équivalent à 10g de plante que nous avons placé dans deux cristallisoirs pour la solution alcoolique. L’alcool est évaporé jusqu’à obtention d’un résidu de consistance sirupeuse. 16 L’extrait, additionnés de 5ml d’une solution HCl 2N, est chauffé dans un bain-marie pendant 3 à 5 mn avec agitation continuelle. Les solutions acides refroidies à la température ambiante, puis additionnées de 0,5 g de NaCl, sont agitées et filtrées. Il n’y avait pas de précipités, mais quand même nous avons lavé le papier filtre avec un volume suffisant d’une solution de HCl 2N. La solution est divisée en trois parties égales dans 3 tubes à essai. Le premier tube sert de témoin. Par contre, le deuxième tube est additionné de 5 gouttes du réactif de Mayer et le troisième de 5 gouttes du réactif de Wagner.

Test de confirmation

Même si les deux premiers sont négatifs, nous avons quand même effectué ce test à titre d’information. L’ extrait hydroalcoolique, équivalent chacun à 10g de plantes sèches broyées en poudre sont traités par une solution de HCl 5% , chauffes pendant 5 mn sous agitation , additionnés d’un volume de NH4OH à 25% jusqu’à pH = 9 , puis extraits trois fois par de chloroforme . Les solutions chloroformiques sont combinées, puis évaporées à sec. Les résidus , additionnés de 5 ml de HCl 2N puis agités avec une tige de verre , sont chauffés dans un bain-marie pendant 3 mn , puis refroidis et filtrés . Le filtrat est ensuite soumis au test de Mayer et Wagner.

Les Flavonoïdes et leuconthocyanes

Ce sont de composés polyphénoliques caractérisés par un enchaînement C6-C3-C6 , cette famille comporte diverses sous-classe : les flavones , les flavanes , les flavanols, les flavononols , les anthocyanes , etc . 17 Figure 3 : Composées flavonoïdes

Flavonoïdes : Test de WILSTATER (Test à la cyanidine)

Le résidu est repris dans de l’éthanol 80% puis filtré sur papier filtre. Le filtrat est ensuite réparti dans 4 tubes à essai dont un sert de témoin. Dans le premier tube, 0,5 ml d’acide chlorhydrique concentré et 2 tournures de magnésium sont ajoutés. Dans le deuxième tube, en plus des réactifs précédents, 1 ml d’eau distillée et 1 ml d’alcool isomylique sont ajoutés. Le virage de coloration ci-après indique la présence de flavonoïdes : au rouge pour les flavones au rouge violacé pour les flavonones au pourpre pour les flavonols

Leuconthocyanes : Test de BATE-SMITH

Dans le troisième tube : 0,5 ml d’acide chlorhydrique concentré est ajouté , puis le tout est porté au bain-marie bouillant pendant 30 min . La présence de leuconthocyanes est indiquée par l’apparition d’une coloration rouge violette après refroidissement (FOND et Coll , 1977 ) .

Les tanins et les polyphénols

Ce sont des composés phénoliques condensés. Toutefois il existe deux types de tanins : Tanins galliques appelés aussi tanins hydrolysables ; qui sont des esters d’oses en général : de glucose et d’acides phénoliques.

Table des matières

I. INTRODUCTION GENERALE
II. GENERALITES
II.1 Situation en matière d’hypertension à Madagascar
II.1.1 Définition
II.1.2 Facteur de l’hypertension
II.1.3 Evolution de la maladie
II.1.4 La tension idéale
II.1.5 Manifestations
II.1.6 Quelques préventions
II.2 Répartition de l’hypertension et des référés en consultations externes des CSB de Madagascar dans les six provinces
II.3 Médicaments antihypertenseurs utilisés à Madagascar
II.4 La place des plantes médicinales dans le système de santé
III. METHODOLOGIES
III.1 Matériels
III.1.1 Le matériel végétal
III.1.1.1 Choix de plantes présumées à propriété antihypertenseur et localisation du lieu de récolte
III.1.1.2 Collecte des matériels végétaux
III.1.1.3 Localisation
III.1.1.4 Position systématique
III.1.1.5 Description botanique
III.1.1.6 Distribution géographique
III.1.1.7 Ecologie
III.1.1.8 Autres utilisations thérapeutiques
III.1.2 Matériels de laboratoire
III.1.2.1 Matériels
III.1.2.2 Produits chimiques
III.2 Méthodes
III.2.1 Préparation de l’extrait hydroalcoolique
III.2.2 Screening phytochimique
III.2.2.1 Les alcaloïdes
III.2.2.1.1 Macération chlorhydrique
III.2.2.1.2 Test préliminaire
III.2.2.1.3 Test de confirmation
III.2.2.2 Les Flavonoïdes et leuconthocyanes
III.2.2.2.1 Flavonoïdes : Test de WILSTATER (Test à la cyanidine)
III.2.2.2.2 Leuconthocyanes : Test de BATE-SMITH
III.2.2.3 Les tanins et les polyphénols
III.2.2.3.1 Test à la gélatine
III.2.2.3.2 Test à la gélatine salée
III.2.2.3.3 Test au chlorure ferrique
III.2.2.4 Les anthraquinones
III.2.2.5 Les saponines
III.2.2.6 Les stéroïdes et triterpènes
III.2.2.6.1 Test de LIEBERMANN-BURCHARD
III.2.2.6.2 Test de SALKOWSKI
III.2.2.7 Les Cardenolides et bufadenolides
III.2.2.7.1 Les désoxyoses : test de KELLER-KILLIANI
III.2.2.7.2 Les lactones insaturés : test de KEDDE
III.2.3 L’extraction
III.2.3.1 Différentes techniques d’extraction utilisées
III.2.3.1.1 Macération
III.2.3.1.2 Par chauffage à reflux
III.2.3.1.3 Par partage
III.2.3.2 Mise au point de méthode d’extraction
III.2.3.2.1 Préparation des extraits bruts
III.2.3.2.2 Méthode d’extraction par des solvants de polarité croissante
III.2.3.3 Extraction adoptée
III.2.3.3.1 Test biologique
III.2.4 Recherche de principes actifs
III.2.4.1 Analyse chromatographique sur CCM monodimensionnelle
III.2.4.1.1 Définition
III.2.4.1.2 Appareillage
III.2.4.1.3 Principe de la technique
III.2.4.1.4 L’éluant
III.2.4.1.5 Révélation
III.2.4.2 Analyse chromatographique sur CCM bidimensionnelle de l’extrait acétate d’éthyle
III.2.5 Fractionnement bioguidé
III.2.5.1 Chromatographie liquide à basse pression (CLBP)
III.2.5.1.1 Définition de CLBP
III.2.5.1.2 Remplissage de la colonne
III.2.5.1.3 Préparation du dépôt sec
III.2.5.1.4 Préparation du dépôt liquide
III.2.5.1.5 Elution
III.2.6 Isolement de produit majoritaire
III.2.6.1 Chromatographie liquide à basse pression (CLBP) de la fraction qui contient le produit majoritaire (l’extrait I1)
III.2.6.2 Recherche du nombre de constituants des extrait(s) actif(s)
IV. RESULTATS ET DISCUSSIONS
IV.1 Préparation de l’extrait aqueux de PSB
IV.2 Préparation de l’extrait hydroalcoolique
IV.3 Résultats de sreening phytochimique
IV.4 L’extraction
IV.4.1 Différentes techniques d’extraction
IV.4.1.1 Méthode d’extraction par solvant des polarités croissantes
IV.4.1.2 Extraction adoptée
IV.5 Mise au point de méthode d’extraction
IV.5.1 Préparation des extraits bruts
IV.5.2 Test biologique
IV.5.3 Recherche de principes actifs
IV.5.3.1 CLBP de l’extrait acétate d’éthyle
IV.5.3.2 Analyse chromatographique sur CCM bidimensionnel de l’extrait acétate d’éthyle
IV.5.3.3 Isolement des produit majoritaires de la fraction I1
IV.5.3.4 Test biologique de CLBP de fraction obtenu de I1
V. CONCLUSION
VI. REFERENCES
VI.1 BIBLIOGRAPHIE
VI.2 WEBOGRAPHIE