Manuel pratique d’analyse de l’eau

Les bactéries coliformes

Concepts

• les Coliformes totaux (bactéries coliformes) – bacilles gram-négatifs, aérobies ou anaérobies facultatifs, non sporulés, oxydase-négatifs, capables de développer en présence de sels biliaires ou d’agents tenso-actifs qui fermentent le lactose en produisant de l’acide, du gaz et de l’aldéhyde à 35,0 ± 0,5oC pendant 24-48 heures, et qui peuvent présenter une activité enzyme ß – galactosité. La majorité des bactéries coliformes appartiennent au genre Escherichia, Citrobacter, Klebsiella et Enterobacter, bien que plusieurs autres genres et espèces appartiennent également au groupe;

• coliformes fécaux (thermo-tolérants) – sous-groupe de bactéries coliformes qui fermentent le lactose à 44,5 ± 0,2oC sous 24 heures, dont le principal représentant est la bactérie Escherichia, d’origine exclusivement fécale; • Escherichia coli – bactérie du groupe coliforme qui fermente la lactose et le mannitol, produisant de l’acide et du gaz à 44,5 ± 0,2oC pendant 24 heures, produit de l’indole à partir de tryptophane, oxydase négative, n’hydrolyse pas l’urée et présente les enzymes ß ß-galactosidase et la glucuronidase, et est considéré comme l’indicateur le plus précis de la contamination fécale récente et de présence éventuelle de micro-organismes pathogènes.
L’origine fécale de E. coli est incontestable et sa nature omniprésente peu probable, ce qui valide son rôle précis d’organisme indicateur de contamination tant dans les eaux naturelles que traitées.
Le comptage standard des bactéries est très important pendant le processus de traitement de l’eau, car il permet d’évaluer l’efficacité des différentes étapes de traitement.
Il est également important de connaître la densité des bactéries car une augmentation considérable de la population bactérienne peut nuire à la détection des organismes coliformes. Bien que la plupart de ces bactéries ne soit pas pathogènes, elles peuvent présenter des risques pour la santé, ainsi pour que la qualité de l’eau, provoquant des odeurs et saveurs désagréables.
Matériel utilisé en bactériologie a) autoclave; b) incubateur biologique; c) incubateur de stérilisation et de de séchage; d) balance; e) distillateur; f) bain-marie; g) compteur de colonies; h) anse de platine avec câble; i) tube Durhan; j) tube à essai; k) milieux de culture; l) coton; m) flacons de collecte; n) pipettes graduées; o) pipeteur; p) papier aluminium; q) lampe à alcool ou bec Bunsen; r) boîtes de Pétri; s) pincettes en acier inoxydable; t) filtres à membrane; u) porte-filtres en verre ou en acier inoxydable; v) lampe à ultra-violet.

Préparation du matériel en verre

Tubes à essai
a) placer le tube de Durham en position inversée à l’intérieur du tube à essai; b) boucher le tube à essai avec un tampon d’ouate.
Flacons de collecte
a) mettre deux gouttes (0,1 ml) de thiosulfate de sodium à 10% dans le flacon; b) placer une bande de papier aluminium entre le goulot et le bouchon de la bouteille; c) envelopper le goulot et le bouchon dans du papier aluminium.
Pipettes
a) mettre une petite boule de coton dans la buse de la pipette; b) l’envelopper dans du papier aluminium ou du papier kraft.
Boîtes de Pétri en verre
a) les envelopper dans du papier d’aluminium ou du papaier kraft. Remarque: les flacons de collecte, les pipettes et les boîtes de Petri doivent être stérilisés et avant d’être préparés ils doivent être propres et secs (voir la stérilisation p 38.). Milieux de culture
a) Bouillon lactosé; b) Bouillon lactosé bilié au vert brillant à 2%;
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c) Bouillon EC; d) Plate Count Agar.
Préparation des milieux de culture
Bouillon lactosé à concentration double
a) peser 26 grammes de milieu de culture et les dissoudre dans 1.000 ml d’eau distillée; b) répartir dans des tubes à essai (10 ml dans chaque tube), fermer les tubes; c) stériliser à 121oC (1 Kg/cm2 de pression) en autoclave durant 15 minutes; d) laisser refroidir; e) garder au réfrigérateur (valable pendant une semaine).