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Rapport de stage méthodes retenues dans le protocole de purification, tutoriel & guide de travaux pratiques en pdf.
LES ANIMAUX D’EXPERIMENTATION
Les souris
Les souris Mus musculus variété albinos issues de la souche « TANA-SWISS » utilisées pendant les tests, ont été fournies par l’Institut Pasteur de Madagascar (IPM).
Les têtards de grenouille
Les têtards de grenouille Ptychadena mascareniensis utilisés sont au stade « sans pattes ». Ils sont capturés dans les plans d’eau des environs du campus universitaire 3 jours avant le test pour qu’ils s’adaptent aux conditions du laboratoire.
Les larves de moustique
Des larves du moustique Culex quinquefasciatus au stade 3 de développement, c’est-àdire âgées de 6 à 7 jours, capturées dans les eaux stagnantes situées aux environs du campus universitaire ont été utilisées. Elles sont capturées le jour du test.
Les alevins de poisson
Des alevins de poisson du genre Cyprinus carpio de 2 ± 0,5 cm âgés de 2 mois, ont été utilisés pour le test. Ils ont été fournis par une ferme d’élevage située à Ambohimangakely (Antananarivo).
Les plantes d’expérimentation
Des graines sèches de plantes potagères Monocotylédones et de Dicotylédones ont été utilisées pour l’étude des effets sur les végétaux. Ces graines dont la liste est donnée dans le tableau n°7, proviennent d’un marchand de semences à Ambohipo.
Les souches microbiennes utilisées comme germes-tests
Les souches pathogènes utilisées ont été isolées à partir de la collection des souches pathogènes fournie par le laboratoire de Microbiologie du CNRE (Centre National de Recherche sur l’Environnement).
Les milieux de culture
(DUMAS, 1953 ; LARPENT et LARPENT-GOURGAUD, 1997)
Les précultures microbiennes ont été préparées dans du bouillon nutritif de MUELLER-HINTON. Le milieu solide de MUELLER-HINTON a été utilisé pour l’étude de l’activité sur les microorganismes. La composition de ces différents milieux est donnée en Annexe
Les animaux à sang chaud
Estimation de la toxicité des extraits
Il s’agit d’une observation, sur la souris, des modifications de leur comportement et de leur état physiologique après l’injection intrapéritonéale (ip), d’un volume de 0,3 ml d’extrait par 25 g d’animal. Chaque test nécessite deux lots d’animaux :
le premier lot de souris qui reçoit de sérum physiologique, sert de témoin ; le deuxième lot est destiné au test.
Détermination de la DL50 (24h)
La DL50 (24 h) ou Dose létale 50% (24 h) est la dose qui tue 50% de souris testées après 24 h de test. Pour cela, 6 lots de 5 souris ont été testés avec 6 doses en progression géométrique de raison R déterminée.
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