Extrait du mémoire: Etude de la valeur prédictive de la fragmentation de l’ADN spermatique

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B. Injections de gonadotrophines
Des injections de gonadotrophines sont continuées jusqu’à ce que plusieurs follicules en développement atteignent le diamètre de 18-22 millimètres. Les injections sont habituellement données pendant un total de 12-16 jours mais l’administration peut être prolongée à 21 jours pour de mauvaises répondeuses ou quand il y a une approche très prudente à la superovulation, par exemple, dans celles qui ont eu un syndrome précédent d’hyperstimulation ovarienne (OHSS pour Ovarian Hyper Stimulation Syndrome) ou celles connues pour avoir des ovaires polykystiques (Godwin, 2004).
3.4. Déclenchements d’ovulation
3.4.1. Injection de l’hormone gonadotrophique chorionique
Puisque le pic naturel de LH est supprimé en employant GnRHa, des déclenchements alternatifs d’ovulation sont exigés. La gonadotrophine chorionique humaine (hCG) est une hormone glycoprotéique qui partage les homologies de structure principales avec la LH et peut induire la maturation similaire d’ovocyte dans les follicules en développement. Une injection de médicament est administrée quand les follicules en développement atteignent la taille adéquate.
Les ovocytes sont aspirés des ovaires environ 34-36 heures après l’injection d’hCG.
L’administration de GnRHa est arrêtée une fois que le hCG est injectée (Godwin, 2004).
3.4.2. Balayage par l’échographie
Le balayage par l’échographie est la méthode principale de surveiller la réponse de la femme à la stimulation ovarienne.
Une première écographie est effectuée 10-14 jours après début du traitement de GnRHa. La prochaine écographie sera programmée pour avoir lieu après six à huit jours d’injections de gonadotrophine. Plus tard, des écographies sont effectuées quotidiennement, chaque jour ou à  plus longs intervalles selon la réponse observée de la patiente. Le nombre de follicules en développement dans chaque ovaire est vérifié et leur taille est mesurée (Godwin, 2004).
3.4.3. Analyses hormonales
La concentration de l’œstrogène, de la progestérone, de FSH et de la LH peut être mesurée par les prises de sang qui sont effectuées 10-14 jours après début du traitement par GnRHa. Ceci permet de s’assurer qu’un contrôle adéquat a été réalisé par la fonction pituitaire. L’analyse suivante mesure principalement l’œstrogène qui est produit par les follicules en développement dans les ovaires. La concentration de cette hormone dans le sang peut donner une indication à quel point les ovaires répondent à la stimulation et si la femme est au-dessus de la réponse aux injections de gonadotrophine (Godwin, 2004).
3.5. Ponction d’ovocytes
La patiente se présente à l’unité de procréation assistée le matin du procédé. Elle devrait être à jeun depuis au moins cinq heures. De diverses formes d’anesthésies peuvent être employées mais les sédatifs et les narcotiques intraveineux de courte durée sont les plus communs (Godwin, 2004). Une échographie transvaginale est effectuée et les ovocytes sont aspirés à partir des follicules dans les deux ovaires par une aiguille qui est employée pour percer la face extérieure vaginale et pour piquer le follicule.
Chaque tube de fluide aspiré est examiné pour identifier l’ovocyte qui est alors enlevé et lavé dans un milieu de culture propre et mis dans un incubateur (Godwin, 2004).
Eclosion assistée (hatching)
Le hatching consiste à fragiliser la zone pellucide soit chimiquement à l’aide de Tyrode acide, soit mécaniquement, en l’éclosion du blastocyste (Zoran and Saval, 1999).
3.6. ICSI
Au cœur de l’équipement installé on trouve un microscope à contraste de phase inversé (figure V.1). L’équipement de Micromanipulation est monté sur le microscope pour l’usage pendant le procédé d’ICSI (figure V.2) (Godwin, 2004). La micropipette, chargée d’un seul spermatozoïde, est introduite dans le cytoplasme ovulaire, qui est aspiré en partie pour vérifier la pénétration, puis refoulé à sa place en même temps que le spermatozoïde (figure V.3). La préparation est remise à l’étuve. Le lendemain matin, au bout de 17 heures environ, un nouvel examen permet de repérer les deux pronucléus. Le surlendemain, les embryons, au stade de deux à quatre cellules, sont classés (Zoran and Saval, 1999).

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Sommaire: Mémoire online master: Etude de la valeur prédictive de la fragmentation de l’ADN spermatique pour le succès de la fécondation in vitro

Liste des figures
Liste des tableaux
Liste des abréviations
Introduction
Partie théorique
Chapitre I. Rappel anatomophysiologique sur l’appareil reproducteur de l’homme et de la femme
1. Appareil génital masculin
2. Appareil génital féminin
3. Le cycle hormonal de la femme
Chapitre II. Stérilités féminines
1. Anomalies du vagin
2. Anomalies du cervix
3. Anomalies du l’utérus
4. Anomalies des trompes de Fallope
5. Anomalies des ovaires
6. Endométriose
7. Les avortements spontanés à répétition (ASR)
8. Infertilité non expliquée
Chapitre III. Stérilités masculines
1. Anomalies de l’éjaculation
2. Cause immunologique
3. Anomalies isolées du plasma séminal
4. Causes systémiques
5. Causes toxiques
6. Anomalies congénitales
7. Dommages testiculaires acquis
8. Infection de glandes accessoires masculines
9. Varicocèle
10. Causes endocrines
11. Causes iatrogéniques
12. Anomalies non expliquées du sperme
Chapitre IV. L’ADN spermatique
1. Structure de la chromatine spermatique
2. Fragmentation de l’ADN spermatique
3. Les tests de fragmentation d’ADN
Chapitre V. Injection intracytoplasmique des spermatozoïdes (ICSI)
1. Définition de l’ICSI
2. Indications de l’ICSI
3. Technique de l’ICSI
4. Diagnostic et surveillance de la grossesse au début
5. Méthodes d’évaluation de la viabilité des pré-embryons
Partie pratique
Chapitre VI. Patients, matériels et méthodes et analyse statistique
1. Patients, matériels et méthodes
1.1. Patients
1.2. Prélèvement du sperme
1.3. Préparation du sperme par la centrifugation par gradient de densité
1.4. Analyse des paramètres standards de sperme
1.5. Procédure de l’injection intracytoplasmique des spermatozoïdes (ICSI)
1.6. Evaluation de la fécondation et qualité des embryons
1.7. Phase lutéale et teste de grossesse
1.8. Test de fragmentation de l’ADN spermatique par SCD
2. Analyse statistique
Chapitre VII. Résultats et Discussion
1. Caractéristiques générales des couples étudiés
2. Indice de fragmentation d’ADN spermatique (IFA)
3. Etude de l’influence de l’âge des hommes sur l’IFA
4. Comparaison du nombre d’antécédents de recours à une technique de PMA  selon l’IFA
5. Etude de l’influence du tabagisme des hommes sur l’IFA
6. Etude de la relation entre l’IFA et différents paramètres standard du sperme
7. Etude de la valeur prédictive de l’IFA
8. Etude de l’effet de l’âge des femmes
Conclusions et perspectives
Références bibliographiques
Annexes
Annexe 1. Fiche technique de PureSperm® 100
Annexe 2. Fiche technique de FertiCult TM Flushing medium
Annexe 3. Fiche technique FertiCult TM IVF medium
Annexe 4. Fiche technique de Hyaluronidase in FertiCult TM Flushing medium
Annexe 5. Fiche technique de 10 % PVP in FertiCult Flushing Medium
Annexe 6. Fiche technique de FertiCult Miniral Oil
Annexe 7. Chambre de Makler
Annexe 8. Microscope à contraste de phase
Annexe 9. Placement des gouttelettes de milieu de culture des ovocytes et de milieu visqueux PVP
Annexe 10. Questionnaire aux couples candidats à l’ICSI
Glossaire

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